消疲怡神口服液对“慢性疲劳”模型动物血浆及脑组织中单胺类物质含量变化的影响
作者：刘雁峰 王天芳 季绍良 李峰 陈家旭 康纯洁 刘晓兰 刘燕
单位：北京中医药大学基础医学院 北京100029
关键词：慢性疲劳；模型动物；单胺类物质；消疲怡神口服液
北京中医药大学学报990521 摘要：为了进一步探讨慢性疲劳综合征的发生机制，在应用复合应激因素研制“慢性疲劳”模型动物的基础上，对模型动物血浆及脑组织中单胺类物质含量进行了检测，并观察了以补气理气、调理肝脾为组方原则的中药复方消疲怡神口服液对该类物质的调节作用。研究结果显示，模型动物出现了血及脑组织中单胺类物质含量的变化，这些变化可能是“慢性疲劳”发生的病理机制之一。消疲怡神口服液可能通过改善这些单胺类物质含量的变化，缓解“慢性疲劳”大鼠躯体及心理的应激状态，从而促进疲劳状态的恢复。
Effects of Xiaopiyishen on the Change of Monoamine Substances
, 百拇医药
Concentration in the Animal Model's Plasma and Brain Tissues
Liu Yanfeng(刘雁峰)， Wang Tianfang(王天芳)，Ji Shaoliang(季绍良)，et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT: To further approach to the pathogenesis of chronic fatigue system (CFS), the research based on establishing CFS animal model by complex stress factors, assayed the concentration of monoamine substance in the plasma and brain tissues, and then observe the modulating function of Xiaopiyishen on them. The results show CFS animal appears the changes of the above substances, which are perhaps one of the pathogenesis. Xiaopiyishen relieve somatic and psychological stress of CFS rat by modulating the changes of these substances so to facilitate the rehabilitation of CFS.
, 百拇医药
KEY WORDS: Chronic fatigue; Model animal; Monoamine substance; Xiaopiyisheng
1 材料与方法
1.1 动物
二级Wistar雄性大鼠，体重160～180 g，由中国药品生物制品鉴定所提供。
1.2 药物
中药复方消疲怡神口服液以补气理气、调理肝脾为组方原则，由黄芪、枳壳、人参、柴胡、陈皮等组成，委托北京市永定制药厂加工。批号960928，规格：10 mL/支(1 mL相当于1 g生药)。阳性对照药人参皂甙片由中美合资吉林省亚威制药有限公司生产，吉卫药准字，批号94032019，规格0.1/片，含人参总皂甙25 mg/片。
, 百拇医药
1.3 造模与取材
将动物分为对照组、模型组、模型加中药复方消疲怡神口服液组(简称中药复方组)及模型加人参皂甙组(简称人参皂甙组)。第1周适应性训练，第2周开始除对照组外，各组大鼠予冷水游泳和进食时电刺激(具体方法见文献[1])。中药复方组和人参皂甙组分别灌胃消疲怡神口服液(2 mL)和人参皂甙溶液(2 mL)，模型组及对照组同时灌胃等量的蒸馏水。至第4周末，各组大鼠经10%水合氯醛麻醉后，颈动脉取血，4%EDTA2钠抗凝，3000 r/min离心15 min，取上清置-70℃冰箱保存。各组动物取血后，断头处死，迅速取出下丘脑和垂体组织，电子天平称重后，置入加有0.06 mol/L DHBA(二羟苄胺)20 μL及0.1 mol/L HClO4380 μL的Eppendorf管中，置于-70℃保存，待测。
1.4 主要试剂、仪器及检测方法
E(肾上腺素)、5-HT(5-羟色胺)、HVA(高香草酸)等为Sigma产品，NE(去甲肾上腺素)为Serva产品，DA为Fluka产品，其他试剂皆为国产分析纯，检测仪器为Waters 510高效液相色谱系统(美国)，电化学检测器为Waters 464型(美国)。每次进样20 μL，检测22 min。
, 百拇医药
1.5 统计处理
所得数据均以平均值±标准差(
±s)表示，组间差异采用方差分析(ANOVN)，用Duncan's检验，以P<0.05作为显著性差异的标准。
2 结果
“慢性疲劳”模型动物血浆及脑组织中单胺类物质含量变化见表1、表2。
表1 各组大鼠血浆中单胺类物质含量变化(pg/L;±s) 组 别
n
NE
DA
, http://www.100md.com
HVA
5-HT
5-HIAA
对 照 组
10
22.64±14.08
369.68±213.31
4.19±1.87
25.16±10.13
90.56±28.49
模 型 组
8
, 百拇医药
44.16±20.43△
501.87±211.10
9.12±4.38△△
41.34±11.86△
165.76±41.53△△
中药复方组
8
19.42±7.93*
513.56±216.27
8.03±1.54△
, 百拇医药
30.76±9.46*
97.24±37.36**
人参皂甙组
8
21.31±14.02*
453.02±174.21
7.56±2.38△
36.88±13.20
108.82±26.15**
注：与对照组比较△P<0.05 △△P<0.01；与模型组比较*P<0.05 **P<0.01表2 各组大鼠脑组织中单胺类神经递质变化(ng/g;±s) 组 别
, 百拇医药
n
NE
DA
DOPAC
HVA
5-HT
5-HIAA
对 照 组
10
7084.43±950.44
966.63±210.82
75.59±28.18
, http://www.100md.com 62.83±14.66
362.95±97.76
655.17±174.38
模 型 组
8
4926.15±1745.98△△
701.68±
149.58△△
50.45±
9.79△
38.06±19.94△
, 百拇医药
212.19±63.40△
409.09±296.22△
中药复方组
8
6127.69±1933.17
938.92±
198.71*
63.87±20.85
57.65±18.89
342.65±178.15
619.74±
, 百拇医药
91.16*
人参皂甙组
8
5684.73±
725.18△△
861.48±177.87
50.10±12.13△
55.09±15.07
330.75±68.17
600.61±
80.41*
, 百拇医药
注：与对照组比较△P<0.05 △△P<0.01；与模型组比较*P<0.053 讨论
应激的重要调节机制交感—肾上腺髓质系统发生变化，可导致血液中肾上腺素、去甲肾上腺素等激素的变化。有报道[2]，持久性应激原刺激，尤其是伴有持久的精神应激时，在E大量释放的同时，NE会大量释放。从本实验结果看，模型组动物血浆中NE含量较之对照组明显增高，中药复方治疗组动物血浆中NE含量有明显的下降，人参皂甙组动物血浆中NE含量也有明显的下降。可见，中药复方消疲怡神口服液与较为公认的抗应激药物人参皂甙片相比都可以增强抗应激反应的能力，故有利于疲劳的恢复。
本实验结果显示，模型动物血浆中DA含量有上升趋势，但变化不甚明显，其代谢产物HVA的含量在模型动物及中药复方组、人参皂甙组中均明显增高，尤其是模型组动物，其含量值与对照组相比P<0.01。5-HT在体内广泛分布并具有多种生物活性，其在神经系统、内分泌系统和外周血中都起着十分重要的生理作用，近年来，神经内分泌学研究不断显示出5-HT与情绪异常有很大关系[3]。在临床上，我们发现许多慢性疲劳患者就诊时叙述曾有过精神打击性生活事件，或精神持久性地处于紧张状态，而其临床表现除躯体疲劳症状外，还有急躁易怒、焦躁不安或抑郁寡欢等情志改变。我们以往的实验也证明，模型动物除了出现躯体疲劳症状外(如力竭游泳时间缩短)，还出现了情志精神状态的改变[1]。而本研究结果显示，模型组动物较之对照组血浆中5-HT含量明显增高，所以5-HT含量的变化也许是“慢性疲劳”模型大鼠情志状态改变的原因之一。本研究还显示，中药复方组动物及人参皂甙组动物血5-HT含量均有一定的下降，5-HT的代谢产物5-HIAA含量也表现出相似的结果。而中药复方消疲怡神口服液较之人参皂甙有更好的调节情绪的作用。
, 百拇医药
从有关CFS的实验研究文献看，多着重于免疫功能与CFS关系的研究，鉴于尚未建立成熟的CFS动物模型，故中枢单胺类神经递质变化与CFS发生机理的关系探讨尚无实验研究报道。中枢神经递质对机体在应激状态下的各种反应起着重要调节作用。有研究表明[4]，可控制应激时，脑内NE的合成、释放、分泌都增加，但能维持平衡，因此脑内NE的含量不变；而在机体不可控制的应激反应中，脑内NE的释放、分泌大于合成的速度，因此NE含量减少。本实验研究显示，“慢性疲劳”大鼠脑组织下丘脑、垂体中NE含量较之对照组明显减少，而中药复方消疲怡神口服液能够调节脑内NE含量。
文献研究表明[4]，DA除与躯体运动功能有密切关系外，在影响机体的一般行为和精神方面起着重要作用。目前，应激引起的中枢DA反应机制尚不完全清楚。从本实验结果看，模型组大鼠脑组织中DA含量较之对照组明显下降，而中药复方组大鼠脑组织中DA含量上升较之人参皂甙组更为明显，DA的代谢产物DOPAC及HVA含量情况与之相似。有报道[5]，5-HT是体内一种重要神经递质，它经突触释放后，一方面作用于受体，一方面通过突触前膜上的5-HT转运体重摄取，脑内5-HT转运体下调可导致精神抑郁、强迫症、焦虑、惊恐等疾病。近年来人们还发现[6]，5-HT不仅是重要的神经递质，而且是重要的免疫调节因子。本实验研究显示，“慢性疲劳”模型大鼠脑组织中5-HT含量明显下降，而中药复方消疲怡神口服液及人参皂甙片对脑组织中5-HT含量及其代谢产物5-HIAA含量有一定的上调作用，且中药复方较人参皂甙更为明显。
, 百拇医药
以上研究结果显示，应用复合应激因素所致的“慢性疲劳”动物模型出现了血及脑组织中单胺类物质含量的变化，而这些变化也许是“慢性疲劳”发生的病理机制之一。以补气理气、调理肝脾为组方原则的中药复方消疲怡神口服液可能通过改善这些单胺类物质含量的变化，缓解了“慢性疲劳”大鼠躯体及心理的应激状况，从而促进了疲劳状态的恢复。
国家自然科学基金委资助课题(N0.39500184)
作者简介:刘雁峰，女，35岁，主治医师，在读医学博士生
参考文献
1 刘雁峰，王天芳，杨维益，等.慢性疲劳的中医病理机制探讨及实验研究——复合应激因素致慢性疲劳动物模型的研究及其行为学观察.中国中医基础医学杂志,1998,4(增刊):157～160
2 屈志炜,刘 云.用高效液相色谱电化学检测器测定大小鼠脑内单胺类物质的研究.中国医学科学院学报,1987,9(10):371～375
3 张殿明,徐隆绍.神经内分泌学.北京:中国医药科技出版社,1991.97～101
4 韩济生.神经科学纲要.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1993.344～398
5 张雪梅,颜寿琪.5-羟色胺转运体研究进展.生理科学进展,1997,28(4):345～348
6 杨贵波.5-HT免疫调节作用研究进展.生理科学进展,1997,28(4):249～251
收稿日期：1999-01-08, http://www.100md.com
单位：北京中医药大学基础医学院 北京100029
关键词：慢性疲劳；模型动物；单胺类物质；消疲怡神口服液
北京中医药大学学报990521 摘要：为了进一步探讨慢性疲劳综合征的发生机制，在应用复合应激因素研制“慢性疲劳”模型动物的基础上，对模型动物血浆及脑组织中单胺类物质含量进行了检测，并观察了以补气理气、调理肝脾为组方原则的中药复方消疲怡神口服液对该类物质的调节作用。研究结果显示，模型动物出现了血及脑组织中单胺类物质含量的变化，这些变化可能是“慢性疲劳”发生的病理机制之一。消疲怡神口服液可能通过改善这些单胺类物质含量的变化，缓解“慢性疲劳”大鼠躯体及心理的应激状态，从而促进疲劳状态的恢复。
Effects of Xiaopiyishen on the Change of Monoamine Substances
, 百拇医药
Concentration in the Animal Model's Plasma and Brain Tissues
Liu Yanfeng(刘雁峰)， Wang Tianfang(王天芳)，Ji Shaoliang(季绍良)，et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT: To further approach to the pathogenesis of chronic fatigue system (CFS), the research based on establishing CFS animal model by complex stress factors, assayed the concentration of monoamine substance in the plasma and brain tissues, and then observe the modulating function of Xiaopiyishen on them. The results show CFS animal appears the changes of the above substances, which are perhaps one of the pathogenesis. Xiaopiyishen relieve somatic and psychological stress of CFS rat by modulating the changes of these substances so to facilitate the rehabilitation of CFS.
, 百拇医药
KEY WORDS: Chronic fatigue; Model animal; Monoamine substance; Xiaopiyisheng
1 材料与方法
1.1 动物
二级Wistar雄性大鼠，体重160～180 g，由中国药品生物制品鉴定所提供。
1.2 药物
中药复方消疲怡神口服液以补气理气、调理肝脾为组方原则，由黄芪、枳壳、人参、柴胡、陈皮等组成，委托北京市永定制药厂加工。批号960928，规格：10 mL/支(1 mL相当于1 g生药)。阳性对照药人参皂甙片由中美合资吉林省亚威制药有限公司生产，吉卫药准字，批号94032019，规格0.1/片，含人参总皂甙25 mg/片。
, 百拇医药
1.3 造模与取材
将动物分为对照组、模型组、模型加中药复方消疲怡神口服液组(简称中药复方组)及模型加人参皂甙组(简称人参皂甙组)。第1周适应性训练，第2周开始除对照组外，各组大鼠予冷水游泳和进食时电刺激(具体方法见文献[1])。中药复方组和人参皂甙组分别灌胃消疲怡神口服液(2 mL)和人参皂甙溶液(2 mL)，模型组及对照组同时灌胃等量的蒸馏水。至第4周末，各组大鼠经10%水合氯醛麻醉后，颈动脉取血，4%EDTA2钠抗凝，3000 r/min离心15 min，取上清置-70℃冰箱保存。各组动物取血后，断头处死，迅速取出下丘脑和垂体组织，电子天平称重后，置入加有0.06 mol/L DHBA(二羟苄胺)20 μL及0.1 mol/L HClO4380 μL的Eppendorf管中，置于-70℃保存，待测。
1.4 主要试剂、仪器及检测方法
E(肾上腺素)、5-HT(5-羟色胺)、HVA(高香草酸)等为Sigma产品，NE(去甲肾上腺素)为Serva产品，DA为Fluka产品，其他试剂皆为国产分析纯，检测仪器为Waters 510高效液相色谱系统(美国)，电化学检测器为Waters 464型(美国)。每次进样20 μL，检测22 min。
, 百拇医药
1.5 统计处理
所得数据均以平均值±标准差(
±s)表示，组间差异采用方差分析(ANOVN)，用Duncan's检验，以P<0.05作为显著性差异的标准。2 结果
“慢性疲劳”模型动物血浆及脑组织中单胺类物质含量变化见表1、表2。
表1 各组大鼠血浆中单胺类物质含量变化(pg/L;
±s) 组 别n
NE
DA
, http://www.100md.com
HVA
5-HT
5-HIAA
对 照 组
10
22.64±14.08
369.68±213.31
4.19±1.87
25.16±10.13
90.56±28.49
模 型 组
8
, 百拇医药
44.16±20.43△
501.87±211.10
9.12±4.38△△
41.34±11.86△
165.76±41.53△△
中药复方组
8
19.42±7.93*
513.56±216.27
8.03±1.54△
, 百拇医药
30.76±9.46*
97.24±37.36**
人参皂甙组
8
21.31±14.02*
453.02±174.21
7.56±2.38△
36.88±13.20
108.82±26.15**
注：与对照组比较△P<0.05 △△P<0.01；与模型组比较*P<0.05 **P<0.01表2 各组大鼠脑组织中单胺类神经递质变化(ng/g;
±s) 组 别, 百拇医药
n
NE
DA
DOPAC
HVA
5-HT
5-HIAA
对 照 组
10
7084.43±950.44
966.63±210.82
75.59±28.18
, http://www.100md.com 62.83±14.66
362.95±97.76
655.17±174.38
模 型 组
8
4926.15±1745.98△△
701.68±
149.58△△
50.45±
9.79△
38.06±19.94△
, 百拇医药
212.19±63.40△
409.09±296.22△
中药复方组
8
6127.69±1933.17
938.92±
198.71*
63.87±20.85
57.65±18.89
342.65±178.15
619.74±
, 百拇医药
91.16*
人参皂甙组
8
5684.73±
725.18△△
861.48±177.87
50.10±12.13△
55.09±15.07
330.75±68.17
600.61±
80.41*
, 百拇医药
注：与对照组比较△P<0.05 △△P<0.01；与模型组比较*P<0.053 讨论
应激的重要调节机制交感—肾上腺髓质系统发生变化，可导致血液中肾上腺素、去甲肾上腺素等激素的变化。有报道[2]，持久性应激原刺激，尤其是伴有持久的精神应激时，在E大量释放的同时，NE会大量释放。从本实验结果看，模型组动物血浆中NE含量较之对照组明显增高，中药复方治疗组动物血浆中NE含量有明显的下降，人参皂甙组动物血浆中NE含量也有明显的下降。可见，中药复方消疲怡神口服液与较为公认的抗应激药物人参皂甙片相比都可以增强抗应激反应的能力，故有利于疲劳的恢复。
本实验结果显示，模型动物血浆中DA含量有上升趋势，但变化不甚明显，其代谢产物HVA的含量在模型动物及中药复方组、人参皂甙组中均明显增高，尤其是模型组动物，其含量值与对照组相比P<0.01。5-HT在体内广泛分布并具有多种生物活性，其在神经系统、内分泌系统和外周血中都起着十分重要的生理作用，近年来，神经内分泌学研究不断显示出5-HT与情绪异常有很大关系[3]。在临床上，我们发现许多慢性疲劳患者就诊时叙述曾有过精神打击性生活事件，或精神持久性地处于紧张状态，而其临床表现除躯体疲劳症状外，还有急躁易怒、焦躁不安或抑郁寡欢等情志改变。我们以往的实验也证明，模型动物除了出现躯体疲劳症状外(如力竭游泳时间缩短)，还出现了情志精神状态的改变[1]。而本研究结果显示，模型组动物较之对照组血浆中5-HT含量明显增高，所以5-HT含量的变化也许是“慢性疲劳”模型大鼠情志状态改变的原因之一。本研究还显示，中药复方组动物及人参皂甙组动物血5-HT含量均有一定的下降，5-HT的代谢产物5-HIAA含量也表现出相似的结果。而中药复方消疲怡神口服液较之人参皂甙有更好的调节情绪的作用。
, 百拇医药
从有关CFS的实验研究文献看，多着重于免疫功能与CFS关系的研究，鉴于尚未建立成熟的CFS动物模型，故中枢单胺类神经递质变化与CFS发生机理的关系探讨尚无实验研究报道。中枢神经递质对机体在应激状态下的各种反应起着重要调节作用。有研究表明[4]，可控制应激时，脑内NE的合成、释放、分泌都增加，但能维持平衡，因此脑内NE的含量不变；而在机体不可控制的应激反应中，脑内NE的释放、分泌大于合成的速度，因此NE含量减少。本实验研究显示，“慢性疲劳”大鼠脑组织下丘脑、垂体中NE含量较之对照组明显减少，而中药复方消疲怡神口服液能够调节脑内NE含量。
文献研究表明[4]，DA除与躯体运动功能有密切关系外，在影响机体的一般行为和精神方面起着重要作用。目前，应激引起的中枢DA反应机制尚不完全清楚。从本实验结果看，模型组大鼠脑组织中DA含量较之对照组明显下降，而中药复方组大鼠脑组织中DA含量上升较之人参皂甙组更为明显，DA的代谢产物DOPAC及HVA含量情况与之相似。有报道[5]，5-HT是体内一种重要神经递质，它经突触释放后，一方面作用于受体，一方面通过突触前膜上的5-HT转运体重摄取，脑内5-HT转运体下调可导致精神抑郁、强迫症、焦虑、惊恐等疾病。近年来人们还发现[6]，5-HT不仅是重要的神经递质，而且是重要的免疫调节因子。本实验研究显示，“慢性疲劳”模型大鼠脑组织中5-HT含量明显下降，而中药复方消疲怡神口服液及人参皂甙片对脑组织中5-HT含量及其代谢产物5-HIAA含量有一定的上调作用，且中药复方较人参皂甙更为明显。
, 百拇医药
以上研究结果显示，应用复合应激因素所致的“慢性疲劳”动物模型出现了血及脑组织中单胺类物质含量的变化，而这些变化也许是“慢性疲劳”发生的病理机制之一。以补气理气、调理肝脾为组方原则的中药复方消疲怡神口服液可能通过改善这些单胺类物质含量的变化，缓解了“慢性疲劳”大鼠躯体及心理的应激状况，从而促进了疲劳状态的恢复。
国家自然科学基金委资助课题(N0.39500184)
作者简介:刘雁峰，女，35岁，主治医师，在读医学博士生
参考文献
1 刘雁峰，王天芳，杨维益，等.慢性疲劳的中医病理机制探讨及实验研究——复合应激因素致慢性疲劳动物模型的研究及其行为学观察.中国中医基础医学杂志,1998,4(增刊):157～160
2 屈志炜,刘 云.用高效液相色谱电化学检测器测定大小鼠脑内单胺类物质的研究.中国医学科学院学报,1987,9(10):371～375
3 张殿明,徐隆绍.神经内分泌学.北京:中国医药科技出版社,1991.97～101
4 韩济生.神经科学纲要.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1993.344～398
5 张雪梅,颜寿琪.5-羟色胺转运体研究进展.生理科学进展,1997,28(4):345～348
6 杨贵波.5-HT免疫调节作用研究进展.生理科学进展,1997,28(4):249～251
收稿日期：1999-01-08, http://www.100md.com