糖皮质激素快速激活PC12细胞Erk1/2 MAPK
作者：邱俭 陈宜张 王平 裴钢
单位：邱俭 陈宜张(第二军医大学生理教研室，神经科学研究所，上海 200433)；王平 裴钢(中科院上海细胞生物学研究所，上海 200031)
关键词：
中国病理生理杂志0010285
目的：研究皮质酮在PC12细胞是否能激活Erk1/2 MAPK及探讨其胞内信号转导机制。方法：(1)PC12细胞培养；(2)免疫蛋白印迹(Western blotting)法检测Erk1/2 MAPK的磷酸化；(3)用间接免疫荧光染色法观察激活的Erk 1/2 MAPK由胞质向核转位的情况；(4)MAPK活性直接测定法。结果：(1)皮质酮可以浓度依赖性方式刺激MAPK磷酸化，激活曲线为钟形，最大激活浓度为10-9 mol/L(时间为15 min)；(2)皮质酮以时间依赖性方式刺激MAPK磷酸化，皮质酮作用5 min时，有Erk1/2 MAPK激活，最大激活时间为15 min；(3)皮质酮、B-BSA(皮质酮偶连的牛血清白蛋白)和NGF可激活Erk1/2 MAPK活性，Erk1/2 MAPK的激活可能不是由经典的糖皮质激素受体介导，因为B-BSA能快速激活Erk1/2 MAPK；(4)MAPK激酶抑制剂(PD98059)可抑制皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK磷酸化，进一步证明皮质酮激活Erk1/2 MAPK；(5)皮质酮、B-BSA和NGF可引起Erk1/2 MAPK核转位，免疫荧光染色结果显示15 min时，由皮质酮和B-BSA激活的Erk1/2 MAPK从胞质转移到细胞核；(6)皮质酮可通过蛋白激酶C激活Erk 1/2 MAPK,蛋白激酶C激活剂(PMA)能激活Erk1/2MAPK，而蛋白激酶C抑制剂(G6976)能阻断皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK激活。结论：本研究首次发现皮质酮在PC12细胞能快速激活Erk1/2 MAPK，并清楚地显示皮质酮可能作用在细胞膜上通过蛋白激酶C激活Erk1/2 MAPK。, 百拇医药
单位：邱俭 陈宜张(第二军医大学生理教研室，神经科学研究所，上海 200433)；王平 裴钢(中科院上海细胞生物学研究所，上海 200031)
关键词：
中国病理生理杂志0010285
目的：研究皮质酮在PC12细胞是否能激活Erk1/2 MAPK及探讨其胞内信号转导机制。方法：(1)PC12细胞培养；(2)免疫蛋白印迹(Western blotting)法检测Erk1/2 MAPK的磷酸化；(3)用间接免疫荧光染色法观察激活的Erk 1/2 MAPK由胞质向核转位的情况；(4)MAPK活性直接测定法。结果：(1)皮质酮可以浓度依赖性方式刺激MAPK磷酸化，激活曲线为钟形，最大激活浓度为10-9 mol/L(时间为15 min)；(2)皮质酮以时间依赖性方式刺激MAPK磷酸化，皮质酮作用5 min时，有Erk1/2 MAPK激活，最大激活时间为15 min；(3)皮质酮、B-BSA(皮质酮偶连的牛血清白蛋白)和NGF可激活Erk1/2 MAPK活性，Erk1/2 MAPK的激活可能不是由经典的糖皮质激素受体介导，因为B-BSA能快速激活Erk1/2 MAPK；(4)MAPK激酶抑制剂(PD98059)可抑制皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK磷酸化，进一步证明皮质酮激活Erk1/2 MAPK；(5)皮质酮、B-BSA和NGF可引起Erk1/2 MAPK核转位，免疫荧光染色结果显示15 min时，由皮质酮和B-BSA激活的Erk1/2 MAPK从胞质转移到细胞核；(6)皮质酮可通过蛋白激酶C激活Erk 1/2 MAPK,蛋白激酶C激活剂(PMA)能激活Erk1/2MAPK，而蛋白激酶C抑制剂(G6976)能阻断皮质酮诱导的Erk1/2 MAPK激活。结论：本研究首次发现皮质酮在PC12细胞能快速激活Erk1/2 MAPK，并清楚地显示皮质酮可能作用在细胞膜上通过蛋白激酶C激活Erk1/2 MAPK。, 百拇医药