胶束动电毛细管色谱法分离测定去痛片中的4种组分
作者：王桂芳 张守尧 贺巍
单位：王桂芳(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)；张守尧(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)；贺巍(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)
关键词：胶束动电毛细管色谱法；去痛片；氨基比林；非那西丁；咖啡因；苯巴比妥
第一军医大学学报000433 摘要：目的 建立一种用胶束动电毛细管色谱法测定去痛片中各组分含量的方法。方法 用硼酸·氢氧化钠·十二烷基磺酸钠为缓冲液进行分离，以茶碱为内标，254 nm为测定波长。结果 样品中咖啡因、氨基比林、非那西丁、苯巴比妥等4组分完全分离且呈良好线性关系，其加样回收率为98.26%～101.87%。结论 本方法简便、准确，可作为该制剂各组分含量的测定方法。
中图分类号：R927.2; R971.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)04-0331-02
, http://www.100md.com
Determination of four components in Qutong tablets by micellar electrokinetic capillary chromatography
WANG Gui-fang, ZHANG Shou-yao, HE Wei
(Department of Pharmaceutics, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282, China)
Abstract: Objective To establish a method for determining the components in Qutong tablets by a micellar electrokinetic capillary chromatography. Method The buffer was boric acid-sodium hydrochloride-SDS. Theophylline was used as the internal standard and the detection wavelength was 214 nm. Results Four components including caffine, aminophyrine, phenacetin and phenobarbital were completely separated and determined. The recoveries of the 4 components ranged from 98.26% to101.87%. Conclusion The method was simple, accurate, and could be used for the quality control of Qutong tablets.
, 百拇医药
Key word: micellar electrokinetic capillary chromatography; qutong tablets; aminophyrine; phenacetin; caffine; phenobarbital
去痛片为最常用的解热镇痛抗风湿药，是一种含氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4种组分的复合制剂。其质量控制一直采用容量分析法，操作繁琐，分离提取耗费大量有机溶剂。有报道可用动态规划[1]、褶合曲线分析[2]等方法，不经分离同时测定去痛片中4种组分的含量。作者应用胶束动电毛细管色谱法[3]成功地分离并测定了去痛片中4种组分，结果准确，操作简便快速。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
HP3D Capillary Electrophoresis System (Hewlett-Packard，美国)，配置HP化学工作站，二极管阵列紫外检测器。熔融石英毛细管(Hewlett-Packard，64 cm×75 μm)。
, 百拇医药
1.2 试剂
氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥对照品及茶碱由广东省药检所、广州市药检所提供；去痛片为市售药品；十二烷基磺酸钠(SDS)为化学纯，硼酸、氢氧化钠为分析纯。
2 方法与结果
2.1 电泳条件的建立
配制20 mmol/L硼酸液、20 mmol/L氢氧化钠液和0.4 mol/L SDS液。将3种溶液按不同的体积比进行组合选择，得出运行缓冲液硼酸·氢氧化钠·SDS最佳组合体积比为150∶150∶13(pH 10)。其它操作条件为：柱温25 ℃；运行电压15 kV，极性为正极到负极；进样压力2.96 Pa，时间3 s；检测波长254 nm；样品溶剂为水。样品溶液和运行缓冲液均经过0.45 μm微孔滤膜过滤。使用毛细管前，先用0.1 mol/L氢氧化钠液冲洗4 min，再用水冲洗2 min，最后用运行缓冲液冲洗平衡3 min。每次测定前重复这一过程。
, 百拇医药
2.2 内标的选择
在选定的电泳条件下，茶碱的迁移时间介于去痛片各组分的迁移时间之间，峰形良好且分离完全，故选择茶碱作为内标物。
2.3 线性范围的确定
分别精密称取各对照品适量，置同一量瓶中，加温水适量，超声溶解并稀释成一系列梯度浓度溶液，各稀释液均含相同浓度的茶碱内标物。按选定的电泳条件进样测定，以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(y)，以各对照品的浓度为横坐标(x)。各组分的线性范围、回归方程及相关系数见表1。
表1 标准曲线数据(n=5)
Tab.1 Data of standard calibration curves (n=5)
Component
, 百拇医药
Linear range
(μg/ml)
Regression equation
r
Caffeine
42.2～189.9
y=2.565×10-2+3.391×10-3x
0.9989
Aminopyrine
125.0～562.5
y=1.840×10-2+5.565×10-3x
, 百拇医药
0.9991
Phenacetin
125.6～565.2
y=1.092×10-1+9.306×10-3x
0.9997
Phenobarbital
18.2～81.9
y=7.512×10-3+4.556×10-3x
0.9982
2.4 精密度试验
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本实验条件下氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4组分及内标的迁移时间均在6～9 min之内(图1)。其迁移时间的相对标准差RSD(%)分别为：0.37、1.15、0.69、1.06、0.78；相对峰面积的RSD(%)分别为：0.93、1.19、1.12、1.35(n=5)。
图1 样品的电泳谱图
Fig.1 Capillary electropherogram of the sample
1. Caffeine; 2. Aminopyrine; 3. Phenacetin;
4. Phenobarbitone; 5.Theophylline
2.5 样品测定
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取去痛片10片，精密称定后，研细。精密称取片粉适量(约相当于1片重)，置于200 ml量瓶中，加温水适量，超声溶解后，加水至刻度，摇匀，过滤。精密量取滤液适量，加入相同浓度的内标液。按已选定的实验条件进样测定。3批样品用本法及中国药典法的测定结果见表2。
表2 样品测定结果
Tab.2 Determination of samples
No.
HPCE method
Chinese pharmacopoeia method
Ami
Phena
, 百拇医药 Caf
Pheno
Ami
Phena
Caf
Pheno
1
98.26
97.91
96.77
97.01
98.04
98.11
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97.13
97.22
2
100.53
98.72
97.53
96.78
99.89
98.80
97.19
97.03
3
97.18
, 百拇医药
96.35
95.74
96.77
97.00
96.55
95.37
96.41
Ami:Aminopyrine; Phena:Phenacetin; Caf:Caffeine; Pheno:Phenobarbital
2.6 加样回收试验
精密称取适量的4种对照品，分别加到已知含量的去痛片样品细粉中，按样品测定的方法制备样液并测定。4组分的加样回收率(%)和RSD(%)(n=3)分别为：氨基比林98.26、1.11；非那西丁100.84、0.73；咖啡因100.84、1.20；苯巴比妥101.87、1.45。
, 百拇医药
3 讨论
本试验观察了SDS浓度对组分迁移时间的影响。当SDS浓度在8～20 mmol/L时，所有组分的迁移时间均随SDS浓度的增加而增加。本实验所用SDS浓度约为17 mmol/L。
3.2 本试验观察了运行缓冲液pH对组分迁移时间的影响。 当缓冲液pH=10时，各组分分离完全。此缓冲液硼酸、氢氧化钠、SDS最佳组合的体积比为150∶150∶13。
由于操作简便和快捷，随着毛细管色谱仪的日渐发展和推广应用，本法可作为去痛片生产中一种可取的质量控制法。
作者简介：王桂芳(1948-)，女，安徽金寨人，1974年毕业于第二军医大学，教授，主任药师，电话：85143910
参考文献：
[1] 杨金玉. 动态规划法在去痛片及克感敏片定量分析中的应用研究[J]. 药学学报, 1988, 23(10):756-8.
[2] 吴玉田，王桂芳，龚华礼. 褶合曲线分析法应用于去痛片中4个组分的同时测定[J]. 药学学报, 1990, 25(3):204-7.
[3] 孙曾培. 胶束动电毛细管色谱法在药物分析中的应用[J]. 药物分析杂志, 1993, 13(1):48-
50.
收稿日期：1999-10-25, 百拇医药
单位：王桂芳(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)；张守尧(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)；贺巍(第一军医大学珠江医院药剂科, 广东 广州 510282)
关键词：胶束动电毛细管色谱法；去痛片；氨基比林；非那西丁；咖啡因；苯巴比妥
第一军医大学学报000433 摘要：目的 建立一种用胶束动电毛细管色谱法测定去痛片中各组分含量的方法。方法 用硼酸·氢氧化钠·十二烷基磺酸钠为缓冲液进行分离，以茶碱为内标，254 nm为测定波长。结果 样品中咖啡因、氨基比林、非那西丁、苯巴比妥等4组分完全分离且呈良好线性关系，其加样回收率为98.26%～101.87%。结论 本方法简便、准确，可作为该制剂各组分含量的测定方法。
中图分类号：R927.2; R971.1 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)04-0331-02
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Determination of four components in Qutong tablets by micellar electrokinetic capillary chromatography
WANG Gui-fang, ZHANG Shou-yao, HE Wei
(Department of Pharmaceutics, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282, China)
Abstract: Objective To establish a method for determining the components in Qutong tablets by a micellar electrokinetic capillary chromatography. Method The buffer was boric acid-sodium hydrochloride-SDS. Theophylline was used as the internal standard and the detection wavelength was 214 nm. Results Four components including caffine, aminophyrine, phenacetin and phenobarbital were completely separated and determined. The recoveries of the 4 components ranged from 98.26% to101.87%. Conclusion The method was simple, accurate, and could be used for the quality control of Qutong tablets.
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Key word: micellar electrokinetic capillary chromatography; qutong tablets; aminophyrine; phenacetin; caffine; phenobarbital
去痛片为最常用的解热镇痛抗风湿药，是一种含氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4种组分的复合制剂。其质量控制一直采用容量分析法，操作繁琐，分离提取耗费大量有机溶剂。有报道可用动态规划[1]、褶合曲线分析[2]等方法，不经分离同时测定去痛片中4种组分的含量。作者应用胶束动电毛细管色谱法[3]成功地分离并测定了去痛片中4种组分，结果准确，操作简便快速。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
HP3D Capillary Electrophoresis System (Hewlett-Packard，美国)，配置HP化学工作站，二极管阵列紫外检测器。熔融石英毛细管(Hewlett-Packard，64 cm×75 μm)。
, 百拇医药
1.2 试剂
氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥对照品及茶碱由广东省药检所、广州市药检所提供；去痛片为市售药品；十二烷基磺酸钠(SDS)为化学纯，硼酸、氢氧化钠为分析纯。
2 方法与结果
2.1 电泳条件的建立
配制20 mmol/L硼酸液、20 mmol/L氢氧化钠液和0.4 mol/L SDS液。将3种溶液按不同的体积比进行组合选择，得出运行缓冲液硼酸·氢氧化钠·SDS最佳组合体积比为150∶150∶13(pH 10)。其它操作条件为：柱温25 ℃；运行电压15 kV，极性为正极到负极；进样压力2.96 Pa，时间3 s；检测波长254 nm；样品溶剂为水。样品溶液和运行缓冲液均经过0.45 μm微孔滤膜过滤。使用毛细管前，先用0.1 mol/L氢氧化钠液冲洗4 min，再用水冲洗2 min，最后用运行缓冲液冲洗平衡3 min。每次测定前重复这一过程。
, 百拇医药
2.2 内标的选择
在选定的电泳条件下，茶碱的迁移时间介于去痛片各组分的迁移时间之间，峰形良好且分离完全，故选择茶碱作为内标物。
2.3 线性范围的确定
分别精密称取各对照品适量，置同一量瓶中，加温水适量，超声溶解并稀释成一系列梯度浓度溶液，各稀释液均含相同浓度的茶碱内标物。按选定的电泳条件进样测定，以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(y)，以各对照品的浓度为横坐标(x)。各组分的线性范围、回归方程及相关系数见表1。
表1 标准曲线数据(n=5)
Tab.1 Data of standard calibration curves (n=5)
Component
, 百拇医药
Linear range
(μg/ml)
Regression equation
r
Caffeine
42.2～189.9
y=2.565×10-2+3.391×10-3x
0.9989
Aminopyrine
125.0～562.5
y=1.840×10-2+5.565×10-3x
, 百拇医药
0.9991
Phenacetin
125.6～565.2
y=1.092×10-1+9.306×10-3x
0.9997
Phenobarbital
18.2～81.9
y=7.512×10-3+4.556×10-3x
0.9982
2.4 精密度试验
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本实验条件下氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥4组分及内标的迁移时间均在6～9 min之内(图1)。其迁移时间的相对标准差RSD(%)分别为：0.37、1.15、0.69、1.06、0.78；相对峰面积的RSD(%)分别为：0.93、1.19、1.12、1.35(n=5)。
图1 样品的电泳谱图
Fig.1 Capillary electropherogram of the sample
1. Caffeine; 2. Aminopyrine; 3. Phenacetin;
4. Phenobarbitone; 5.Theophylline
2.5 样品测定
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取去痛片10片，精密称定后，研细。精密称取片粉适量(约相当于1片重)，置于200 ml量瓶中，加温水适量，超声溶解后，加水至刻度，摇匀，过滤。精密量取滤液适量，加入相同浓度的内标液。按已选定的实验条件进样测定。3批样品用本法及中国药典法的测定结果见表2。
表2 样品测定结果
Tab.2 Determination of samples
No.
HPCE method
Chinese pharmacopoeia method
Ami
Phena
, 百拇医药 Caf
Pheno
Ami
Phena
Caf
Pheno
1
98.26
97.91
96.77
97.01
98.04
98.11
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97.13
97.22
2
100.53
98.72
97.53
96.78
99.89
98.80
97.19
97.03
3
97.18
, 百拇医药
96.35
95.74
96.77
97.00
96.55
95.37
96.41
Ami:Aminopyrine; Phena:Phenacetin; Caf:Caffeine; Pheno:Phenobarbital
2.6 加样回收试验
精密称取适量的4种对照品，分别加到已知含量的去痛片样品细粉中，按样品测定的方法制备样液并测定。4组分的加样回收率(%)和RSD(%)(n=3)分别为：氨基比林98.26、1.11；非那西丁100.84、0.73；咖啡因100.84、1.20；苯巴比妥101.87、1.45。
, 百拇医药
3 讨论
本试验观察了SDS浓度对组分迁移时间的影响。当SDS浓度在8～20 mmol/L时，所有组分的迁移时间均随SDS浓度的增加而增加。本实验所用SDS浓度约为17 mmol/L。
3.2 本试验观察了运行缓冲液pH对组分迁移时间的影响。 当缓冲液pH=10时，各组分分离完全。此缓冲液硼酸、氢氧化钠、SDS最佳组合的体积比为150∶150∶13。
由于操作简便和快捷，随着毛细管色谱仪的日渐发展和推广应用，本法可作为去痛片生产中一种可取的质量控制法。
作者简介：王桂芳(1948-)，女，安徽金寨人，1974年毕业于第二军医大学，教授，主任药师，电话：85143910
参考文献：
[1] 杨金玉. 动态规划法在去痛片及克感敏片定量分析中的应用研究[J]. 药学学报, 1988, 23(10):756-8.
[2] 吴玉田，王桂芳，龚华礼. 褶合曲线分析法应用于去痛片中4个组分的同时测定[J]. 药学学报, 1990, 25(3):204-7.
[3] 孙曾培. 胶束动电毛细管色谱法在药物分析中的应用[J]. 药物分析杂志, 1993, 13(1):48-
50.
收稿日期：1999-10-25, 百拇医药