“6.25”60Co源辐射事故随访病人骨髓样品的电镜观察
作者：颜永碧 陆月良 郑尊
单位：200433 上海，第二军医大学中心实验室
关键词：
980119.htm 作者对1990年上海“6.25”60Co源辐射事故所致5例骨髓型ARS幸存者急性期进行了骨髓样品系统的电镜观察和研究。我们发现骨髓血细胞的超微结构均有不同程度的病理改变。随后从1991～1995年又每年进行了随访观察，现将电镜观察结果综合报告如下。
1 材料和方法
骨穿后的骨髓样品用培养液1∶4(骨髓：培养液)稀释。将稀释后的骨髓液慢慢加到2～4ml的淋巴细胞分离液上面，离心2 000转/分，20分钟，然后吸出骨髓细胞层，再离心去除多余液体，将骨髓细胞分为两份，一份做髓过氧化物酶(MPO)反应及麦芽胚凝集素(WGA)标记，另一份做血小板过氧化物酶(PPO)反应。以后的样品制备过程均按本室常规方法制备[1]。
, 百拇医药
2 结果
2.1 骨髓细胞的超微结构观察
从5次骨髓样品的电镜观察结果比较看，5例骨髓中血细胞的超微结构，绝大部分细胞已属于正常，少数细胞的超微结构有改变。异常细胞的数量及细胞改变的程度与受照射剂量有关，两例重度患者骨髓样品中的异常细胞多，而且持续时间长。在1991年标本中还可见到较多的坏死细胞，这些细胞的周围有大量淋巴细胞或巨噬细胞聚集(图1，2)，3例中度病例骨髓中这种现象少见。1994年“龙”和“俊”的骨髓样品中有些细胞核内常染色质较正常多，核仁明显，胞浆内有大量扩张的内质网，这类细胞生长活跃。在1995年的样品中仍存有这类细胞。3例中度患者，1995年在“军”的骨髓中观察到单核细胞数量偏高，但细胞微细结构和正常单核细胞相似(图3)，几例患者血细胞超微结构的改变有共性其特点如下。
2.1.1 细胞膜：1991，1992年的样品均有一些细胞膜表面呈现大量小的锯齿状，或出现多而长的微绒毛突起，甚至出现胞膜损伤(图4)，1993年后细胞膜的变化少见。
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2.1.2 细胞浆：我们重点观察5例骨髓血细胞内各细胞器的分布情况，电镜下有些细胞可见细胞器区域性分布现象，如粒细胞的嗜天青颗粒偏于细胞的一侧，内质网集中出现在胞浆的某一区域(图5)。1992，1993年的标本“给”和“俊”的有些细胞浆内线粒体出现大量空泡变。
2.1.3 细胞核：在血细胞超微结构的观察中，细胞核的变化明显，数量多，持续时间亦长，一直到1995年取材的样品还有核的畸形，呈半圆或多角形(图6)。异染色质增多，呈团块分布，有的核内常染色质占优势，核仁显著。
2.2 血细胞的电镜细胞化学观察
2.2.1 WGA受体的胶金标记：采用WGA对5例血细胞膜表面进行免疫标记，结果显示有些细胞标记特别强，这类细胞表现为核大浆少，核内异染色质多(图7，8)。还发现膜有损伤的细胞标记物少或没有标记。
2.2.2 MPO及PPO反应：通过观察没有发现这些功能酶的异常表现。
, http://www.100md.com
3 讨论
通过电镜对5例患者骨髓血细胞的定期随访观察，迄今绝大部分细胞正常，少数细胞有膜的突起或损伤改变，胞浆内细胞器的区域性分布，细胞核畸形，常染色质与异染色质量的改变及分布异常。根据大量研究资料表明[2]射线引起DNA损伤，有可能引发癌基因启动，虽然损伤可通过酶介导的DNA修复，但即使有不到百万分之一的启动细胞残留下来也有可能发展成单株性恶化。在照射发生5年后，少数细胞存在上述超微结构改变，是否与其DNA基因修复完善程度或基因改变有关尚待通过分子生物学技术进一步观察研究。关于“龙”，“俊”1991，1992年样品见到较多的坏死细胞，大量淋巴细胞和巨噬细胞聚集，可能也是因为人体受到大剂量射线照射后，血细胞还在不断的凋亡和修复。从电镜观察的整个结果提示，1994年的取材样品，2例重度患者的骨髓均有生长较活跃的细胞群，这些细胞表现为细胞大小不等，核内常染色质多，核仁明显，胞浆中有扩张的内质网，在1995年的标本中仍然可见这种细胞，受照射骨髓出现这类细胞群的转归，应与其他方面观察配合，进行系统密切观察。
, 百拇医药
麦芽胚凝集素受体在各血细胞中的标记结果表明，膜表面糖脂，糖蛋白的改变十分显著，这与细胞功能和细胞成熟程度有关，在同一患者中，细胞膜呈现损伤较多的细胞WGA的标记少，反之则多。细胞膜糖蛋白和糖脂在细胞的多种功能中起重要作用，如细胞间的相互作用，细胞对外源物质的识别，抗原—抗体反应，及细胞间的相互识别等，故而可以利用上述检测方法，结合MPO、PPO反应，探讨细胞功能状态某些方面的变化，对细胞的早期变异提供参考。
“6.25”60Co源辐射事故随访病人骨髓样品的电镜观察
图1 巨噬细胞周围有淋巴细胞聚集，×2500 图2 坏死细胞周围有巨噬细胞，×5000
图3 正常单核细胞，×8000图4 血细胞膜损伤，×6000图5 细胞浆内嗜天青颗粒偏于一侧，×4800 图6 细胞核畸形，×8000 图7 WGA受体的胶金标记，×9000图8 WGA受体的胶金标记，×14000
参 考 文 献
1 颜永碧，夏愿耀，范荣仁.介绍一种游离细胞电镜样品的制作方法.第二军医大学学报，1983，4(4)：291.
2 Cox R.辐射致癌机理.中华放射医学与防护杂志，1993，13：419.
(收稿：1997-04-15 修回：1997-05-20), 百拇医药
单位：200433 上海，第二军医大学中心实验室
关键词：
980119.htm 作者对1990年上海“6.25”60Co源辐射事故所致5例骨髓型ARS幸存者急性期进行了骨髓样品系统的电镜观察和研究。我们发现骨髓血细胞的超微结构均有不同程度的病理改变。随后从1991～1995年又每年进行了随访观察，现将电镜观察结果综合报告如下。
1 材料和方法
骨穿后的骨髓样品用培养液1∶4(骨髓：培养液)稀释。将稀释后的骨髓液慢慢加到2～4ml的淋巴细胞分离液上面，离心2 000转/分，20分钟，然后吸出骨髓细胞层，再离心去除多余液体，将骨髓细胞分为两份，一份做髓过氧化物酶(MPO)反应及麦芽胚凝集素(WGA)标记，另一份做血小板过氧化物酶(PPO)反应。以后的样品制备过程均按本室常规方法制备[1]。
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2 结果
2.1 骨髓细胞的超微结构观察
从5次骨髓样品的电镜观察结果比较看，5例骨髓中血细胞的超微结构，绝大部分细胞已属于正常，少数细胞的超微结构有改变。异常细胞的数量及细胞改变的程度与受照射剂量有关，两例重度患者骨髓样品中的异常细胞多，而且持续时间长。在1991年标本中还可见到较多的坏死细胞，这些细胞的周围有大量淋巴细胞或巨噬细胞聚集(图1，2)，3例中度病例骨髓中这种现象少见。1994年“龙”和“俊”的骨髓样品中有些细胞核内常染色质较正常多，核仁明显，胞浆内有大量扩张的内质网，这类细胞生长活跃。在1995年的样品中仍存有这类细胞。3例中度患者，1995年在“军”的骨髓中观察到单核细胞数量偏高，但细胞微细结构和正常单核细胞相似(图3)，几例患者血细胞超微结构的改变有共性其特点如下。
2.1.1 细胞膜：1991，1992年的样品均有一些细胞膜表面呈现大量小的锯齿状，或出现多而长的微绒毛突起，甚至出现胞膜损伤(图4)，1993年后细胞膜的变化少见。
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2.1.2 细胞浆：我们重点观察5例骨髓血细胞内各细胞器的分布情况，电镜下有些细胞可见细胞器区域性分布现象，如粒细胞的嗜天青颗粒偏于细胞的一侧，内质网集中出现在胞浆的某一区域(图5)。1992，1993年的标本“给”和“俊”的有些细胞浆内线粒体出现大量空泡变。
2.1.3 细胞核：在血细胞超微结构的观察中，细胞核的变化明显，数量多，持续时间亦长，一直到1995年取材的样品还有核的畸形，呈半圆或多角形(图6)。异染色质增多，呈团块分布，有的核内常染色质占优势，核仁显著。
2.2 血细胞的电镜细胞化学观察
2.2.1 WGA受体的胶金标记：采用WGA对5例血细胞膜表面进行免疫标记，结果显示有些细胞标记特别强，这类细胞表现为核大浆少，核内异染色质多(图7，8)。还发现膜有损伤的细胞标记物少或没有标记。
2.2.2 MPO及PPO反应：通过观察没有发现这些功能酶的异常表现。
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3 讨论
通过电镜对5例患者骨髓血细胞的定期随访观察，迄今绝大部分细胞正常，少数细胞有膜的突起或损伤改变，胞浆内细胞器的区域性分布，细胞核畸形，常染色质与异染色质量的改变及分布异常。根据大量研究资料表明[2]射线引起DNA损伤，有可能引发癌基因启动，虽然损伤可通过酶介导的DNA修复，但即使有不到百万分之一的启动细胞残留下来也有可能发展成单株性恶化。在照射发生5年后，少数细胞存在上述超微结构改变，是否与其DNA基因修复完善程度或基因改变有关尚待通过分子生物学技术进一步观察研究。关于“龙”，“俊”1991，1992年样品见到较多的坏死细胞，大量淋巴细胞和巨噬细胞聚集，可能也是因为人体受到大剂量射线照射后，血细胞还在不断的凋亡和修复。从电镜观察的整个结果提示，1994年的取材样品，2例重度患者的骨髓均有生长较活跃的细胞群，这些细胞表现为细胞大小不等，核内常染色质多，核仁明显，胞浆中有扩张的内质网，在1995年的标本中仍然可见这种细胞，受照射骨髓出现这类细胞群的转归，应与其他方面观察配合，进行系统密切观察。
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麦芽胚凝集素受体在各血细胞中的标记结果表明，膜表面糖脂，糖蛋白的改变十分显著，这与细胞功能和细胞成熟程度有关，在同一患者中，细胞膜呈现损伤较多的细胞WGA的标记少，反之则多。细胞膜糖蛋白和糖脂在细胞的多种功能中起重要作用，如细胞间的相互作用，细胞对外源物质的识别，抗原—抗体反应，及细胞间的相互识别等，故而可以利用上述检测方法，结合MPO、PPO反应，探讨细胞功能状态某些方面的变化，对细胞的早期变异提供参考。
“6.25”60Co源辐射事故随访病人骨髓样品的电镜观察
图1 巨噬细胞周围有淋巴细胞聚集，×2500 图2 坏死细胞周围有巨噬细胞，×5000
图3 正常单核细胞，×8000图4 血细胞膜损伤，×6000图5 细胞浆内嗜天青颗粒偏于一侧，×4800 图6 细胞核畸形，×8000 图7 WGA受体的胶金标记，×9000图8 WGA受体的胶金标记，×14000
参 考 文 献
1 颜永碧，夏愿耀，范荣仁.介绍一种游离细胞电镜样品的制作方法.第二军医大学学报，1983，4(4)：291.
2 Cox R.辐射致癌机理.中华放射医学与防护杂志，1993，13：419.
(收稿：1997-04-15 修回：1997-05-20), 百拇医药