缺血心肌β受体脱敏现象及机制探讨
作者：唐铁军 吴伟康 别平华 卢汉平 刘秀琴
单位：唐铁军 吴伟康(中山医科大学中西医结合研究所)；别平华(中山医科大学第一军医大学微生物学教研室, 广东 广州 510515)；卢汉平 刘秀琴(中山医科大学放免检测中心, 广东 广州 510089)
关键词：心肌缺血；受体；肾上腺素能β1；脱敏；β1肾上腺素能受体激酶
00zk15摘 要：【目的】 观察心肌缺血状态下β1肾上腺素能受体(β1-AR)脱敏现象，探讨其脱敏的机制。【方法】 用大剂量垂体后叶素(Pit)造成大鼠心肌缺血，采用放射配基受体结合分析测定心肌细胞膜β1-AR密度，放免测定大鼠外周血及心肌组织中cAMP水平，定量RT-PCR方法测定β1-AR及β1-AR激酶(βARK-1)mRNA的表达。【结果】 心肌缺血时β1-AR密度上调，但亲和力下降，血浆及心肌cAMP水平低于正常组(P<0.01或P<0.05)，βARK-1 mRNA表达明显增加(P<0.01)。【结论】 心肌缺血时β-AR数目和功能存在分离现象，这种现象是β-AR脱敏而引起的，其脱敏的机制与β-ARK1 mRNA表达增加有关。
, http://www.100md.com
中图分类号： R541.402 文献标识码：A
文章编号：1000-257(2000)04S0-0053-03
Desensitization of β-adrenoceptor During Myocardial Ischemia
and Mechanism Investigation
TANG Tie-jun, WU Wei-kang
( Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Sun Yat-sen University of Medical Sciences)
LU Han-ping, LIU Xiu-qing
, 百拇医药
(Radioimmunoassay Center of SUMS. Guangzhou, 510089,China.)
BIE Ping-hua
(Department of Microbiology, the First Military Medical University, Guangzhou, 510515, China)
Abstract： 【Objective】 To investigate the mechanism of desensitization of β1-adrenoceptor(β1-AR) during myocardial ischemia. 【Methods】 Myocardial ischemia models of rats were induced by given a booster doses of pituitrin. The density of β1-AR on cardiac membranes was detected by radioligand binding assay. The cAMP levels of plasma and myocardium were detected by radioimmunoassay. The mRNA expression of β-AR and β-adrenoceptor kinase (β-ARK) were detected by RT-PCR assay. 【Results】 In cardiac membranes of ischemic myocardium the density of β-AR were increased but the affinity were decreased. The cAMP levels in plasma and myocardium of myocardial ischemia group were lower than control group(P<0.01 or P<0.05). The mRNA expression of β ARK-1 were significantly increased in the ischemic group. 【Conclusion】 There is a division tendency between the amount and function of β1-AR during myocardial ischemia. It is caused by the desensitization of β1-AR. The mechanism of desensitization is due to the increasing of mRNA expression of β ARK-1.
, 百拇医药
Key words: myocardial ischemia; receptors, adrenergic, beta-1; desensitization ; beta-adrenoceptor kinase
心肌缺血(myocardial ischemia, MI)是所有缺血性心脏病的病理基础，其病理生理机制十分复杂。近年来研究发现肾上腺素能β受体(β-AR)在MI过程中起到重要作用[1～3]。分布于心脏和冠状血管的β1-AR兴奋，可以直接扩张冠状动脉，改善心肌供血。因此，探讨在MI状态下β-AR信号转导改变对MI病理生理的认识具有重要意义。本研究采用垂体后叶素(pituitrin, Pit)造成大鼠MI模型，测定大鼠心肌细胞膜β1-AR的密度、受体的亲和力、血浆及心肌组织中cAMP含量、β1-AR mRNA表达、β1-AR激酶(β ARK-1)mRNA表达，以了解缺血心肌β1-AR信号转导机制的变化，报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
Wistar大鼠20只，雌雄不拘，180～200 g，由广东省医学实验动物研究中心提供，分为缺血组及正常组，每组10只。
1.2 缺血造模
缺血组：给予Pit 10 U/kg，皮下注射，造成心肌缺血。正常组：相同途径给予同剂量的生理盐水。造模后24 h，眶动静脉丛取血1.5 mL，加5%(v/v) EDTA抗凝，离心分离血浆, 处死动物无菌条件下迅速取心肌组织液氮冻存，用于mRNA提取，或即刻匀浆用于β1-AR密度及cAMP检测。
1.3 β1-AR密度检测
采用放射配基受体结合实验方法，高速离心(27 000 g，40 min，4℃)制备心肌细胞膜悬液，以Lowry氏法测定蛋白浓度，用纯度>98%的3H-双氢心得舒(中国原子能科学研究院提供)为放射标记配基，以dL-心得安为非标记配基，作多点饱和分析，Scatchard作图，求得出最大结合位点数(密度，Bmax)及平衡解离常数(亲和力，Kd)。
, 百拇医药
1.4 cAMP检测
采用125I标记放免检测法，测定血清及心肌组织cAMP含量，放免试剂盒为上海中医药大学同位素室产品，具体操作按试剂盒说明进行。
1.5 引物设计及合成
通过GeneBank检索获得大鼠β1-AR mRNA(1 365 bp)、β ARK-1 mRNA(4 190 bp)及β-Actin(325 bp)全序列，用美国Primer 2.2版引物设计软件自行设计3对引物，其引物序列如下：β1-AR：5′-AGCTA CCAGG AACCA TGCAC-3′，5′-CCTCC TACCG CGATT GAA-3′；β ARK-1：5′-ATGAG AAGCT GGAGA CGGAG-3′，5′-CCGAT GATTC GATGC ACAC-3′；β-Actin：5′-CATCG TACTC CTGCT TGCTG-3′，5′-GGCTC CTAGC ACCAT GAAGA-3′。以上引物委托上海生物工程公司合成，PAGE纯化，纯度为99%。扩增片断分别为288 bp，319 bp， 131 bp。
, 百拇医药
1.6 β1-AR及βARK-1 mRNA检测
采用定量RT-PCR方法检测，组织RNA提取试剂盒、一步法RT-PCR试剂盒均为德国Boehringer Mannheim 公司产品，心肌组织总RNA提取按试剂盒说明进行，在含有C.therm.聚合酶的50 μL反应体系中一步完成RT-PCR反应，温度条件设置为94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、70 ℃ 45 s，共循环33次。于第10个循环以后每个循环的延伸时间在前一个循环的基础上增加5 s，最后一个循环结束后，继续72 ℃延伸7 min，结束反应。采用2 g/L琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，电泳条件为60 V，45 min，电泳结束后将凝胶放入EB染液中染色40 min，在凝胶成象及分析系统(UVP公司GDS7500型产品)下观察并成像如图。根据样本条带的灰度值推算出各样本的含量，计算公式如下：
, 百拇医药
1.7 数据处理方法
受体结合实验数据用LIGAND受体分析软件处理, Scatchard作图，求得出各样本的受体结合参数Bmax和Kd值。统计学处理用SPSS 8.0版统计软件在微机上进行t检验统计处理。
2 结 果
心肌细胞膜β-AR的Bmax及Kd缺血组均高于正常组(P<0.01或P<0.05)，说明缺血时β-AR密度增加，但与配体的亲和力下降。见表1。血浆及心肌组织的cAMP水平缺血组均低于正常组(P<0.01或P<0.05)见表2。
表1 各组大鼠心肌细胞膜β受体Bmax及Kd值
Table 1 Bmax and Kd value of cardiac membraneson each group (
±s) Group
, 百拇医药
n
Bmax(fmol/mg)
Kd
Normal
10
32.26±3.69
0.22±0.01
Ischemia
10
39.80±8.53 2)
0.27±0.03 1)
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Compared with normal: 1) P<0.05，2) P<0.01
缺血组β1-AR mRNA表达与正常组比较无显著差异(P>0.05),β ARK-1 mRNA表达高于正常组(P<0.01)，见表3。琼脂糖凝胶电泳图见图1。
表2 各组大鼠血浆及心肌cAMP含量
Table 2 cAMP level in plasma and myocardium (±s) Group
n
Plasma(pmol/ml)
Myocardium(pmol/g)
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Normal
10
30.10±4.45
887.71±102.93
Ischemia
10
23.63±5.57 1)
767.93±143.52 2)
Compared with normal: 1) P<0.01, 2) P<0.05表3 大鼠心肌β1-AR 及β ARK-1 mRNA的表达
Table 3 β1-AR & β ARK-1 mRNA expression in rat myocardium(ng,±s) Group
, 百拇医药
n
β1-AR mRNA
β ARK-1 mRNA
Normal
5
19.84±2.79
15.97±2.91
Ischemia
5
21.14±3.83
42.07±3.29 1)
, 百拇医药 Compared with normal： 1) P<0.01
图1 各组琼脂糖凝胶电泳图
Fig.1 Agarose gel electrophoresis of each group
1: normal group β1-AR, 2: ischemic group β1-AR, 3: normal group β ARK-1, 4: ischemic group β ARK-1, M: Marker
3 讨 论
随着分子心血管病学的发展，近年来对MI的分子机制的认识许多国内外学者认为与β-AR及其信号转导有密切关系[1～3], β-AR属于G蛋白偶联受体，有3种亚型，分布于心脏和血管平滑肌的主要是β1-AR[4，5]。
, 百拇医药
Ungerer等[6]采用大鼠离体心脏Langendoff灌流MI模型，观察到β1-AR在数量与功能的分离现象，这一现象是由于β1-AR脱敏而引起的，关于β1-AR脱敏的机制, 目前认为最主要的是由于β ARK-1 使激动剂占据的活性受体磷酸化, 磷酸化的β1-AR尚失了激活AC-c-AMP等第二信使的能力, 由此使β1-AR功能的70%被抑制[7]，最近的研究表明, 在β ARK-1过度表达的转基因小鼠体内, 其心肌收缩力显著的减弱, 反之, β ARK-1抑制蛋白的过度表达, 则可增强心肌收缩力[8],β ARK-1抑制剂可以恢复心肌脱敏的β-AR的信号传递[9]，由此可见, β ARK-1在β-AR信号转导过程中起到十分重要的作用。
目前国内外对缺血心肌β-AR脱敏的研究多数采用离体心脏灌流方法[6]，或冠状动脉结扎法，尚无采用在体药物造模方法研究β-AR脱敏的报道，本研究采用Pit诱导冠脉痉挛，造成MI模型，其缺血效果明显[10]，而且避免了结扎冠脉产生的创伤应激反应，去除了交感神经系统应激对β-AR的影响，发现大鼠缺血心肌细胞膜同样存在β1-AR密度上调，亲和力下降，其信号转导的第二信使cAMP水平下降，此现象产生的原因与β ARK-1过度表达有关，首次在Pit 所致的MI模型上证实了β-AR脱敏现象及其产生机制。
, http://www.100md.com
基金项目：中国博士后基金资助项目([1999]10)；广东省中医药管理局基金资助项目(99564)
作者简介：唐铁军(1962-)，男，黑龙江牡丹江人，博士，副教授.
参考文献：
[1] Brehm B R, Zvizdic M, Bernhard R, et al. Dynamic regulation of beta-adrenergic receptors by endothelin-1 in smooth-muscle cell [J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1998，31(Suppl 1): S 77.
[2] Brodde O E, Vogelsang M, Broede A, et al. Diminished responsiveness of Gs-coupled receptors in severely failing human heart: no difference in dilated versus ischmic cardiomyopathy [J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1998，31(4):585.
, 百拇医药
[3] Dupuis J Y, Li K, Calderone A, et al. Beta-adrenergic singnal transduction and contractility in the canine heart after cardiopulmonary bypass [J]. Cardiovasc Res, 1997，36(2): 223.
[4] Johnson M. The beta-adrenoceptor [J]. Am J Respir Crit Care Med, 1998，158(5Pt3): S146.
[5] 王建春，王爱宏,邵建华. β肾上腺受体基因变化与心功能不全 [J]. 心血管病学进展, 1999，20(2):88.
[6] Ungerer M, Kessebohm K，Kronsbein K，et al. Activation of β- adrenergic receptor kinase during myocardial ischemia [J]. Circulation Research, 1996，79(3): 455.
, 百拇医药
[7] Lohes M J, Andexinger S, Pitcher J, et al. Receptor-specific desensitization with purified proteins: kinase dependence and receptor- specificity of β- arrestin and arrestin in the β2-adrenergic receptor and rhodopsin systems [J]. J Biol Chem, 1992， 267: 8558.
[8] Koch W J, Rockman H A, Samama P, et al. Cardiac function of mice overexpressing the β-adrenergic receptor kinase or a β-ARK inhibitor [J]. Science, 1995，268: 1350.
[9] Akhter S, Skare C A, Kypson A P, et al. Restoration of beta-adrenergic signaling in failing cardiac ventricular myocytes via adenoviral-mediated gene transfer [J]. Proc Natl Acad Sci, 1997，94(22): 12100.
[10] 唐铁军, 别平华, 陈镜合，等. 实验性冠心病大鼠模型的制作和应用 [J]. 国际心血管杂志, 1999，1(4): 318.
收稿日期：2000-03-24, 百拇医药
单位：唐铁军 吴伟康(中山医科大学中西医结合研究所)；别平华(中山医科大学第一军医大学微生物学教研室, 广东 广州 510515)；卢汉平 刘秀琴(中山医科大学放免检测中心, 广东 广州 510089)
关键词：心肌缺血；受体；肾上腺素能β1；脱敏；β1肾上腺素能受体激酶
00zk15摘 要：【目的】 观察心肌缺血状态下β1肾上腺素能受体(β1-AR)脱敏现象，探讨其脱敏的机制。【方法】 用大剂量垂体后叶素(Pit)造成大鼠心肌缺血，采用放射配基受体结合分析测定心肌细胞膜β1-AR密度，放免测定大鼠外周血及心肌组织中cAMP水平，定量RT-PCR方法测定β1-AR及β1-AR激酶(βARK-1)mRNA的表达。【结果】 心肌缺血时β1-AR密度上调，但亲和力下降，血浆及心肌cAMP水平低于正常组(P<0.01或P<0.05)，βARK-1 mRNA表达明显增加(P<0.01)。【结论】 心肌缺血时β-AR数目和功能存在分离现象，这种现象是β-AR脱敏而引起的，其脱敏的机制与β-ARK1 mRNA表达增加有关。
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中图分类号： R541.402 文献标识码：A
文章编号：1000-257(2000)04S0-0053-03
Desensitization of β-adrenoceptor During Myocardial Ischemia
and Mechanism Investigation
TANG Tie-jun, WU Wei-kang
( Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Sun Yat-sen University of Medical Sciences)
LU Han-ping, LIU Xiu-qing
, 百拇医药
(Radioimmunoassay Center of SUMS. Guangzhou, 510089,China.)
BIE Ping-hua
(Department of Microbiology, the First Military Medical University, Guangzhou, 510515, China)
Abstract： 【Objective】 To investigate the mechanism of desensitization of β1-adrenoceptor(β1-AR) during myocardial ischemia. 【Methods】 Myocardial ischemia models of rats were induced by given a booster doses of pituitrin. The density of β1-AR on cardiac membranes was detected by radioligand binding assay. The cAMP levels of plasma and myocardium were detected by radioimmunoassay. The mRNA expression of β-AR and β-adrenoceptor kinase (β-ARK) were detected by RT-PCR assay. 【Results】 In cardiac membranes of ischemic myocardium the density of β-AR were increased but the affinity were decreased. The cAMP levels in plasma and myocardium of myocardial ischemia group were lower than control group(P<0.01 or P<0.05). The mRNA expression of β ARK-1 were significantly increased in the ischemic group. 【Conclusion】 There is a division tendency between the amount and function of β1-AR during myocardial ischemia. It is caused by the desensitization of β1-AR. The mechanism of desensitization is due to the increasing of mRNA expression of β ARK-1.
, 百拇医药
Key words: myocardial ischemia; receptors, adrenergic, beta-1; desensitization ; beta-adrenoceptor kinase
心肌缺血(myocardial ischemia, MI)是所有缺血性心脏病的病理基础，其病理生理机制十分复杂。近年来研究发现肾上腺素能β受体(β-AR)在MI过程中起到重要作用[1～3]。分布于心脏和冠状血管的β1-AR兴奋，可以直接扩张冠状动脉，改善心肌供血。因此，探讨在MI状态下β-AR信号转导改变对MI病理生理的认识具有重要意义。本研究采用垂体后叶素(pituitrin, Pit)造成大鼠MI模型，测定大鼠心肌细胞膜β1-AR的密度、受体的亲和力、血浆及心肌组织中cAMP含量、β1-AR mRNA表达、β1-AR激酶(β ARK-1)mRNA表达，以了解缺血心肌β1-AR信号转导机制的变化，报告如下。
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1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
Wistar大鼠20只，雌雄不拘，180～200 g，由广东省医学实验动物研究中心提供，分为缺血组及正常组，每组10只。
1.2 缺血造模
缺血组：给予Pit 10 U/kg，皮下注射，造成心肌缺血。正常组：相同途径给予同剂量的生理盐水。造模后24 h，眶动静脉丛取血1.5 mL，加5%(v/v) EDTA抗凝，离心分离血浆, 处死动物无菌条件下迅速取心肌组织液氮冻存，用于mRNA提取，或即刻匀浆用于β1-AR密度及cAMP检测。
1.3 β1-AR密度检测
采用放射配基受体结合实验方法，高速离心(27 000 g，40 min，4℃)制备心肌细胞膜悬液，以Lowry氏法测定蛋白浓度，用纯度>98%的3H-双氢心得舒(中国原子能科学研究院提供)为放射标记配基，以dL-心得安为非标记配基，作多点饱和分析，Scatchard作图，求得出最大结合位点数(密度，Bmax)及平衡解离常数(亲和力，Kd)。
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1.4 cAMP检测
采用125I标记放免检测法，测定血清及心肌组织cAMP含量，放免试剂盒为上海中医药大学同位素室产品，具体操作按试剂盒说明进行。
1.5 引物设计及合成
通过GeneBank检索获得大鼠β1-AR mRNA(1 365 bp)、β ARK-1 mRNA(4 190 bp)及β-Actin(325 bp)全序列，用美国Primer 2.2版引物设计软件自行设计3对引物，其引物序列如下：β1-AR：5′-AGCTA CCAGG AACCA TGCAC-3′，5′-CCTCC TACCG CGATT GAA-3′；β ARK-1：5′-ATGAG AAGCT GGAGA CGGAG-3′，5′-CCGAT GATTC GATGC ACAC-3′；β-Actin：5′-CATCG TACTC CTGCT TGCTG-3′，5′-GGCTC CTAGC ACCAT GAAGA-3′。以上引物委托上海生物工程公司合成，PAGE纯化，纯度为99%。扩增片断分别为288 bp，319 bp， 131 bp。
, 百拇医药
1.6 β1-AR及βARK-1 mRNA检测
采用定量RT-PCR方法检测，组织RNA提取试剂盒、一步法RT-PCR试剂盒均为德国Boehringer Mannheim 公司产品，心肌组织总RNA提取按试剂盒说明进行，在含有C.therm.聚合酶的50 μL反应体系中一步完成RT-PCR反应，温度条件设置为94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、70 ℃ 45 s，共循环33次。于第10个循环以后每个循环的延伸时间在前一个循环的基础上增加5 s，最后一个循环结束后，继续72 ℃延伸7 min，结束反应。采用2 g/L琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，电泳条件为60 V，45 min，电泳结束后将凝胶放入EB染液中染色40 min，在凝胶成象及分析系统(UVP公司GDS7500型产品)下观察并成像如图。根据样本条带的灰度值推算出各样本的含量，计算公式如下：
, 百拇医药
1.7 数据处理方法
受体结合实验数据用LIGAND受体分析软件处理, Scatchard作图，求得出各样本的受体结合参数Bmax和Kd值。统计学处理用SPSS 8.0版统计软件在微机上进行t检验统计处理。
2 结 果
心肌细胞膜β-AR的Bmax及Kd缺血组均高于正常组(P<0.01或P<0.05)，说明缺血时β-AR密度增加，但与配体的亲和力下降。见表1。血浆及心肌组织的cAMP水平缺血组均低于正常组(P<0.01或P<0.05)见表2。
表1 各组大鼠心肌细胞膜β受体Bmax及Kd值
Table 1 Bmax and Kd value of cardiac membraneson each group (
±s) Group, 百拇医药
n
Bmax(fmol/mg)
Kd
Normal
10
32.26±3.69
0.22±0.01
Ischemia
10
39.80±8.53 2)
0.27±0.03 1)
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Compared with normal: 1) P<0.05，2) P<0.01
缺血组β1-AR mRNA表达与正常组比较无显著差异(P>0.05),β ARK-1 mRNA表达高于正常组(P<0.01)，见表3。琼脂糖凝胶电泳图见图1。
表2 各组大鼠血浆及心肌cAMP含量
Table 2 cAMP level in plasma and myocardium (
±s) Groupn
Plasma(pmol/ml)
Myocardium(pmol/g)
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Normal
10
30.10±4.45
887.71±102.93
Ischemia
10
23.63±5.57 1)
767.93±143.52 2)
Compared with normal: 1) P<0.01, 2) P<0.05表3 大鼠心肌β1-AR 及β ARK-1 mRNA的表达
Table 3 β1-AR & β ARK-1 mRNA expression in rat myocardium(ng,
±s) Group, 百拇医药
n
β1-AR mRNA
β ARK-1 mRNA
Normal
5
19.84±2.79
15.97±2.91
Ischemia
5
21.14±3.83
42.07±3.29 1)
, 百拇医药 Compared with normal： 1) P<0.01
图1 各组琼脂糖凝胶电泳图
Fig.1 Agarose gel electrophoresis of each group
1: normal group β1-AR, 2: ischemic group β1-AR, 3: normal group β ARK-1, 4: ischemic group β ARK-1, M: Marker
3 讨 论
随着分子心血管病学的发展，近年来对MI的分子机制的认识许多国内外学者认为与β-AR及其信号转导有密切关系[1～3], β-AR属于G蛋白偶联受体，有3种亚型，分布于心脏和血管平滑肌的主要是β1-AR[4，5]。
, 百拇医药
Ungerer等[6]采用大鼠离体心脏Langendoff灌流MI模型，观察到β1-AR在数量与功能的分离现象，这一现象是由于β1-AR脱敏而引起的，关于β1-AR脱敏的机制, 目前认为最主要的是由于β ARK-1 使激动剂占据的活性受体磷酸化, 磷酸化的β1-AR尚失了激活AC-c-AMP等第二信使的能力, 由此使β1-AR功能的70%被抑制[7]，最近的研究表明, 在β ARK-1过度表达的转基因小鼠体内, 其心肌收缩力显著的减弱, 反之, β ARK-1抑制蛋白的过度表达, 则可增强心肌收缩力[8],β ARK-1抑制剂可以恢复心肌脱敏的β-AR的信号传递[9]，由此可见, β ARK-1在β-AR信号转导过程中起到十分重要的作用。
目前国内外对缺血心肌β-AR脱敏的研究多数采用离体心脏灌流方法[6]，或冠状动脉结扎法，尚无采用在体药物造模方法研究β-AR脱敏的报道，本研究采用Pit诱导冠脉痉挛，造成MI模型，其缺血效果明显[10]，而且避免了结扎冠脉产生的创伤应激反应，去除了交感神经系统应激对β-AR的影响，发现大鼠缺血心肌细胞膜同样存在β1-AR密度上调，亲和力下降，其信号转导的第二信使cAMP水平下降，此现象产生的原因与β ARK-1过度表达有关，首次在Pit 所致的MI模型上证实了β-AR脱敏现象及其产生机制。
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基金项目：中国博士后基金资助项目([1999]10)；广东省中医药管理局基金资助项目(99564)
作者简介：唐铁军(1962-)，男，黑龙江牡丹江人，博士，副教授.
参考文献：
[1] Brehm B R, Zvizdic M, Bernhard R, et al. Dynamic regulation of beta-adrenergic receptors by endothelin-1 in smooth-muscle cell [J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1998，31(Suppl 1): S 77.
[2] Brodde O E, Vogelsang M, Broede A, et al. Diminished responsiveness of Gs-coupled receptors in severely failing human heart: no difference in dilated versus ischmic cardiomyopathy [J]. J Cardiovasc Pharmacol, 1998，31(4):585.
, 百拇医药
[3] Dupuis J Y, Li K, Calderone A, et al. Beta-adrenergic singnal transduction and contractility in the canine heart after cardiopulmonary bypass [J]. Cardiovasc Res, 1997，36(2): 223.
[4] Johnson M. The beta-adrenoceptor [J]. Am J Respir Crit Care Med, 1998，158(5Pt3): S146.
[5] 王建春，王爱宏,邵建华. β肾上腺受体基因变化与心功能不全 [J]. 心血管病学进展, 1999，20(2):88.
[6] Ungerer M, Kessebohm K，Kronsbein K，et al. Activation of β- adrenergic receptor kinase during myocardial ischemia [J]. Circulation Research, 1996，79(3): 455.
, 百拇医药
[7] Lohes M J, Andexinger S, Pitcher J, et al. Receptor-specific desensitization with purified proteins: kinase dependence and receptor- specificity of β- arrestin and arrestin in the β2-adrenergic receptor and rhodopsin systems [J]. J Biol Chem, 1992， 267: 8558.
[8] Koch W J, Rockman H A, Samama P, et al. Cardiac function of mice overexpressing the β-adrenergic receptor kinase or a β-ARK inhibitor [J]. Science, 1995，268: 1350.
[9] Akhter S, Skare C A, Kypson A P, et al. Restoration of beta-adrenergic signaling in failing cardiac ventricular myocytes via adenoviral-mediated gene transfer [J]. Proc Natl Acad Sci, 1997，94(22): 12100.
[10] 唐铁军, 别平华, 陈镜合，等. 实验性冠心病大鼠模型的制作和应用 [J]. 国际心血管杂志, 1999，1(4): 318.
收稿日期：2000-03-24, 百拇医药