涎腺肿瘤C-erb B-2 mRNA表达的研究
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作者：孙宏晨 吴珊 欧阳喈
单位：孙宏晨(白求恩医科大学口腔医学院病理科 长春，130041)；欧阳喈(白求恩医科大学口腔医学院病理科 长春，130041)；吴珊(白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室)
关键词：
中华口腔医学杂志000330 以往有关C-erb B-2表达的研究缺乏癌基因表达产物的确切定位。我们用原位杂交技术研究各涎腺肿瘤及正常涎腺C-erbB-2 mRNA的表达。
一、材料和方法
1.探针：跨人类C-erb B-2癌基因外显子6、7的28个寡核苷酸，序列为5′-CCCAAGTCCTCATTCTACCTGGATGACC-3′，3′末端地高辛标记。
2.组织材料和原位杂交：35例涎腺肿瘤和9例正常涎腺均是白求恩医科大学口腔医学院口腔颌面外科新鲜手术标本，常规固定、石蜡包埋切片后，1 g/L蛋白酶K 37℃消化15 min，0.2 mol/L盐酸和含0.25%醋酸酐的三乙醇胺乙酰化。37℃杂交12 h，分别用0.02% DEPC2XSSC和0.02% DEPC 0.1XSSC洗，免疫组化检测，2% BCIP/NBT显色，甲基绿复染。
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3.图像分析：LUZEX-F图像分析系统光镜下随机选取8个视野，每个视野至少包括100个细胞，测定阳性颗粒数和细胞数等指标，计算每个组织标本每个区域每个细胞颗粒的平均值，统计学处理。上述操作至少由两个人分别进行。
二、结果
正常肌上皮、腺泡上皮、闰管上皮、分泌管上皮和排泄管上皮胞浆中均可见棕色颗粒，尤其增生的导管上皮明显。多形性腺瘤阳性颗粒分布于肿瘤细胞，包括肿瘤性腺上皮细胞、肌上皮细胞、粘液样区细胞和软骨样区细胞，在化生的鳞状上皮细胞亦见有少量的阳性反应。粘液表皮样癌、腺样囊性癌、腺泡细胞癌、乳头状囊腺癌的表达显著高于多形性腺瘤。正常组织的纤维结缔组织和肿瘤间质很少见阳性信号。统计学分析表明，每组肿瘤细胞阳性颗粒数比正常涎腺明显增高(F值为5 370，P<0.0001)，且各恶性肿瘤组均比多形性腺瘤组高(表1)。
表1 9例正常涎腺及35例涎腺
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肿瘤的阳性颗粒数比较 项目
例数
±s
正常涎腺
9
4.17±0.39
多形性腺瘤
12
16.28±0.38
粘液表皮样癌
9
31.44±0.73
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腺样囊性癌
4
36.12±0.73
腺泡细胞癌
4
36.34±0.60
乳头状囊腺癌
6
45.33±0.71
三、讨论
人类正常细胞的恶变是由控制细胞生长、分化的基因改变所引起。普遍认为，基因被激活的机理包括DNA重排、基因扩增、点突变和转录调控异常等。实验证明C-erb B-2的高表达可以诱导体外培养细胞NIH/3T3发生转化。较为明显的C-erb B-2的激活机理包括基因扩增。本研究结果显示，多形性腺瘤存在C-erb B-2癌基因mRNA高表达，提示多形性腺瘤C-erb B-2 mRNA高表达并非由DNA的扩增引起，即使C-erb B-2同时有扩增和过表达的一些涎腺恶性肿瘤，C-erb B-2过表达率也远远大于扩增频率，因此C-erb B-2癌基因RNA表达对其转录调节起着重要的作用。有实验报道，包括Rb基因产物和类固醇激素在内一些蛋白质与C-erb B-2启动因子结合，调节C-erb B-2癌基因转录[1]。因此与基因扩增相比，C-erb B-2 mRNA的表达水平更能反映涎腺肿瘤的生物学行为。本研究中C-erb B-2 mRNA在正常涎腺、良恶性肿瘤均表达，良性肿瘤以多形性腺瘤表达水平高，而各恶性肿瘤C-erb B-2 mRNA表达明显高于多形性腺瘤，表明多形性腺瘤容易复发和恶变有其分子生物学基础，C-erb B-2癌基因的表达同肿瘤分子生物学性质相关。此结果与作者以往的Dotblot杂交结果相似。涎腺恶性肿瘤以腺样囊性癌和乳头状囊腺癌表达水平高，可能同肿瘤细胞浸润性强、易复发和转移有关。我们注意到一些作者用免疫组化研究C-erb B-2癌基因在正常涎腺和涎腺肿瘤的表达不完全相同[2]，其主要原因可能是两种方法敏感性和特异性不同所致。本研究结果支持Riviere等用Northern blot杂交证明涎腺肿瘤存在C-erb B-2 mRNA过度表达。C-erb B-2基因的生物学作用尚不清楚，可能由于其编码蛋白质同EGF受体具有相似的结构，并通过自分泌或旁分泌调节癌细胞的生长而影响肿瘤预后。
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基金项目：卫生部青年基金资助项目(93125)
参考文献
1，Kameda T,Yasui W,Yoshide K,et al.Expression of ERBB-2 in human gastric carcinomas:relationship between p185ERBB2 expression and the gene amplication.Cancer Res,1990,50：8002-8009.
2，Sugano S,Mukai K,Tsuda H,et al.Immunohistochemical study of C-erb B-2 oncoprotein overexpression in huaman major salivary gland carcinoma:an indicator of aggressiveness.Laryngoscope,1992,102：923-927.
(收稿日期：1998-10-19), 百拇医药
单位：孙宏晨(白求恩医科大学口腔医学院病理科 长春，130041)；欧阳喈(白求恩医科大学口腔医学院病理科 长春，130041)；吴珊(白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室)
关键词：
中华口腔医学杂志000330 以往有关C-erb B-2表达的研究缺乏癌基因表达产物的确切定位。我们用原位杂交技术研究各涎腺肿瘤及正常涎腺C-erbB-2 mRNA的表达。
一、材料和方法
1.探针：跨人类C-erb B-2癌基因外显子6、7的28个寡核苷酸，序列为5′-CCCAAGTCCTCATTCTACCTGGATGACC-3′，3′末端地高辛标记。
2.组织材料和原位杂交：35例涎腺肿瘤和9例正常涎腺均是白求恩医科大学口腔医学院口腔颌面外科新鲜手术标本，常规固定、石蜡包埋切片后，1 g/L蛋白酶K 37℃消化15 min，0.2 mol/L盐酸和含0.25%醋酸酐的三乙醇胺乙酰化。37℃杂交12 h，分别用0.02% DEPC2XSSC和0.02% DEPC 0.1XSSC洗，免疫组化检测，2% BCIP/NBT显色，甲基绿复染。
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3.图像分析：LUZEX-F图像分析系统光镜下随机选取8个视野，每个视野至少包括100个细胞，测定阳性颗粒数和细胞数等指标，计算每个组织标本每个区域每个细胞颗粒的平均值，统计学处理。上述操作至少由两个人分别进行。
二、结果
正常肌上皮、腺泡上皮、闰管上皮、分泌管上皮和排泄管上皮胞浆中均可见棕色颗粒，尤其增生的导管上皮明显。多形性腺瘤阳性颗粒分布于肿瘤细胞，包括肿瘤性腺上皮细胞、肌上皮细胞、粘液样区细胞和软骨样区细胞，在化生的鳞状上皮细胞亦见有少量的阳性反应。粘液表皮样癌、腺样囊性癌、腺泡细胞癌、乳头状囊腺癌的表达显著高于多形性腺瘤。正常组织的纤维结缔组织和肿瘤间质很少见阳性信号。统计学分析表明，每组肿瘤细胞阳性颗粒数比正常涎腺明显增高(F值为5 370，P<0.0001)，且各恶性肿瘤组均比多形性腺瘤组高(表1)。
表1 9例正常涎腺及35例涎腺
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肿瘤的阳性颗粒数比较 项目
例数
±s正常涎腺
9
4.17±0.39
多形性腺瘤
12
16.28±0.38
粘液表皮样癌
9
31.44±0.73
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腺样囊性癌
4
36.12±0.73
腺泡细胞癌
4
36.34±0.60
乳头状囊腺癌
6
45.33±0.71
三、讨论
人类正常细胞的恶变是由控制细胞生长、分化的基因改变所引起。普遍认为，基因被激活的机理包括DNA重排、基因扩增、点突变和转录调控异常等。实验证明C-erb B-2的高表达可以诱导体外培养细胞NIH/3T3发生转化。较为明显的C-erb B-2的激活机理包括基因扩增。本研究结果显示，多形性腺瘤存在C-erb B-2癌基因mRNA高表达，提示多形性腺瘤C-erb B-2 mRNA高表达并非由DNA的扩增引起，即使C-erb B-2同时有扩增和过表达的一些涎腺恶性肿瘤，C-erb B-2过表达率也远远大于扩增频率，因此C-erb B-2癌基因RNA表达对其转录调节起着重要的作用。有实验报道，包括Rb基因产物和类固醇激素在内一些蛋白质与C-erb B-2启动因子结合，调节C-erb B-2癌基因转录[1]。因此与基因扩增相比，C-erb B-2 mRNA的表达水平更能反映涎腺肿瘤的生物学行为。本研究中C-erb B-2 mRNA在正常涎腺、良恶性肿瘤均表达，良性肿瘤以多形性腺瘤表达水平高，而各恶性肿瘤C-erb B-2 mRNA表达明显高于多形性腺瘤，表明多形性腺瘤容易复发和恶变有其分子生物学基础，C-erb B-2癌基因的表达同肿瘤分子生物学性质相关。此结果与作者以往的Dotblot杂交结果相似。涎腺恶性肿瘤以腺样囊性癌和乳头状囊腺癌表达水平高，可能同肿瘤细胞浸润性强、易复发和转移有关。我们注意到一些作者用免疫组化研究C-erb B-2癌基因在正常涎腺和涎腺肿瘤的表达不完全相同[2]，其主要原因可能是两种方法敏感性和特异性不同所致。本研究结果支持Riviere等用Northern blot杂交证明涎腺肿瘤存在C-erb B-2 mRNA过度表达。C-erb B-2基因的生物学作用尚不清楚，可能由于其编码蛋白质同EGF受体具有相似的结构，并通过自分泌或旁分泌调节癌细胞的生长而影响肿瘤预后。
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基金项目：卫生部青年基金资助项目(93125)
参考文献
1，Kameda T,Yasui W,Yoshide K,et al.Expression of ERBB-2 in human gastric carcinomas:relationship between p185ERBB2 expression and the gene amplication.Cancer Res,1990,50：8002-8009.
2，Sugano S,Mukai K,Tsuda H,et al.Immunohistochemical study of C-erb B-2 oncoprotein overexpression in huaman major salivary gland carcinoma:an indicator of aggressiveness.Laryngoscope,1992,102：923-927.
(收稿日期：1998-10-19), 百拇医药