CD44V6在表皮肿瘤及恶性黑素瘤的表达
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作者：陈秀琴 徐前喜 林文玉 李荣 朱铁君
单位：100044 北京医科大学人民医院皮肤科[陈秀琴 徐前喜 李荣 朱铁君(指导者)]，中心实验室(林文玉)
关键词：CD44V6；鳞状细胞癌；基底细胞瘤；恶性黑素瘤
中国皮肤科杂志980315 【摘要】目的 研究CD44V6在鳞状细胞癌、基底细胞癌和恶性黑素瘤的表达。方法 免疫组织化学对石蜡包埋组织标本进行检测。结果 10例鳞状细胞癌CD44V6膜表达阳性，且随癌细胞分化程度降低CD44V6表达下调。10例基底细胞癌和8例恶性黑素瘤不表达CD44V6。结论 CD44V6的表达与皮肤肿瘤的类型有关。
Expression of CD44V6 in Human Epidermal Tumours and Malignant Melanoma Chen Xiuqin,Xu Qianxi,Lin Wenyu,et al. Department of Dermatology, People's Hospital,Beijing Medical University, Beijing 100044
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【Abstract】 Objective To study the expression of CD44V6 in human epidermal tumours and malignant melanoma. Methods The expression of CD44V6 was detected by an immunohistochemical technique in squamous cell carcinoma(SCC), basal cell carcinoma(BCC) and malignant melanoma(MM). Results CD44V6 was expressed on the membrane of tumour cells of 10 patients with SCC, and there was downregulation of CD44V6 expression which along with the decrease of differentiation of SCC tumour cells. Tumour cells of 8 patients with MM and 10 patients with BCC did not express CD44V6. Conclusion Our findings suggest that CD44V6 expression is correlated with the types of skin tumours.
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【Key words】 CD44V6 Squamous cell carcinoma Basal cell carcinoma Malignant melanoma
CD44是一广泛分布的透膜糖蛋白，参与多种生理功能。最近，人们对其作为一粘附因子在某些肿瘤中的表达产生了极大的兴趣。鳞状细胞癌(鳞癌)与基底细胞癌(基癌)均是皮肤角朊细胞来源的肿瘤，恶性黑素瘤(恶黑)是恶性程度较高的肿瘤之一，CD44V6在这些肿瘤中的表达情况，国内尚未见报道，国外一些研究也在探索阶段。我们用免疫组织化学方法，用特异性单克隆抗CD44V6抗体检测了10例鳞癌、10例基癌、8例恶黑和10例交界痣中CD44V6的表达，以探讨CD44V6在角朊细胞来源的皮肤肿瘤和在侵袭性较强的恶黑中的表达情况。
材料和方法
1.标本：鳞癌10例、基癌10例、恶黑8例和交界痣10例，均为石蜡包埋标本，经病理学诊断确诊的患者，标本均为原发病灶，并且无转移。
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2.抗CD44V6抗体购自R&D公司、生物素化二抗和辣根过氧化物酶标链霉亲和素购自Dako公司。
3.方法：5μm厚的石蜡切片经脱蜡、水化及缓冲液冲洗(0.05mol/L Tris)加入0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液内，微波炉96℃～98℃加热修复10分钟。加1∶10小牛血清封闭非特异性抗原抗体结合，室温下30分钟，加入1∶100抗CD44V6抗体，4℃冰箱湿盒内过夜，加入1∶400酶标链霉亲合素DAB显色5～6分钟，切片入缓冲液冲洗，苏木素浅染细胞核，脱水、透明、封片。
4.判断标准：细胞膜有棕黄色颗粒状物质沉着者为CD44V6阳性表达细胞；细胞膜棕黄色颗粒染色深、细胞轮廓清晰为表达强；细胞膜棕黄色颗粒染色浅、细胞轮廓清晰度差为表达弱；无任何细胞着色为阴性。
结 果
1.鳞癌CD44V6的表达：10例鳞癌，HE染色，按Broders分级，Ⅰ级3例、Ⅱ级4例、Ⅲ级2例、Ⅳ级1例。做免疫组化染色光镜下观察到切片中未受累表皮细胞均有CD44V6膜表达，细胞膜呈明显棕黄色染色，各层细胞轮廓清晰，以基底层和棘细胞层染色稍强，可做为内对照。在各级鳞癌中，肿瘤细胞膜均表达CD44V6，呈棕黄色染色，但强弱程度有所不同，Ⅰ级和Ⅱ级鳞癌细胞膜棕黄色染色深，Ⅲ、Ⅳ级鳞癌细胞膜棕黄色染色浅，随鳞癌的分级增加CD44V6膜表达有下降趋势。同时观察到在同一级肿瘤中，肿瘤细胞分化好的部位细胞膜染色较深、细胞轮廓清晰；分化差的细胞细胞膜染色浅、细胞轮廓清晰度差。
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2.基癌CD44V6表达：10例基癌CD44V6免疫组化染色镜下观察发现肿瘤细胞膜基本无棕黄色染色，而相应未受累表皮细胞均有CD44V6表达，细胞膜呈棕黄色染色，各层细胞轮廓清晰，以基底层和棘细胞层染色稍强。
3.恶黑及交界痣CD44V6的表达：8例恶黑和10例交界痣，镜下发现黑素瘤细胞和痣细胞均无棕黄色染色，与之相应的未受累表皮可见细胞膜有棕黄色染色。
讨 论
CD44是一种透明质酸受体，它有几种不同类型，其中CD44V6与肿瘤发展有关。据报道，CD44V6的表达情况与肿瘤类型和组织来源有关。G
nthert[1]等研究发现在一些腺体肿瘤细胞例如胃肠道腺癌和乳腺癌细胞中CD44V6呈高水平表达。我们对鳞癌的CD44V6表达研究结果表明鳞癌呈阳性表达，这些结果与Simon[2]和Roye[3]对鳞癌和食道鳞癌CD44V6表达结果一致。Simon[2]和Roye[3]的实验仅对鳞癌CD44V6表达进行了定性分析，对鳞癌分级研究未见报道，而我们进行了各级鳞癌与CD44V6表达相关性的研究，实验结果发现随着肿瘤的分级程度增加，CD44V6膜表达有逐渐减低的趋势。从肿瘤细胞分化程度方面分析，分化好的细胞表达强、分化差的细胞表达弱。这些结果提示鳞癌分级与细胞的分化程度和CD44V6的表达程度有关，随着鳞癌分级增高和鳞癌细胞分化程度降低，CD44V6表达下调。这种随细胞分化程度降低CD44V6表达下调关系的研究，在一定程度上可以做为鳞癌分级的参考指标，并判断预后。正常表皮角朊细胞CD44V6表达与各级鳞癌表达程度的不同，显示出CD44V6可能在维持表皮细胞的正常结构和功能中起一定作用。由于我们目前研究的病例数有限，还需不断积累病例，以进一步研究。基癌的癌细胞基本不表达CD44V6，这与Simon[4]1996年对基癌CD44V6表达下调的研究结果相吻合。虽然正常基底细胞表达CD44V6，但在发展成癌细胞后，CD44V6结构改变或功能失活，从而不能与相应抗CD44V6抗体结合而表现为CD44V6免疫组化阴性。我们的实验结果显示恶黑的肿瘤细胞和交界痣细胞不表达CD44V6，而相应未受累表皮细胞仍清晰表达CD44V6。有人[5，6]对恶黑和交界痣CD44V6表达的研究也发现CD44V6在这两种细胞均无表达，说明恶黑的发生发展与CD44V6的表达无明显关系。
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参考文献
1 Gnthert U, Hoffman W, Rudy S, et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carinoma cells. Cell, 1991,65∶13-24.
2 Simon JC, Heider KH, Dietrich A. Expression of CD44 isoforms in human skin cancer. Eur J Cancer, 1996,32∶1394-1400.
3 Roye GD, Myers RB, Drown D. CD44 expression in dysplastic epithelium and squamous cell carcinoma of the esophagus. Int J Cancer, 1996,69∶254-258.
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4 Simon S, Wolfgang T, Karin H. Expression of CD44 splice variants in human skin and epidermal tumours. Virchows, 1996,428∶141-149.
5 Manten HE, Danen EH, Smit L. Expression of CD44 splice variants in human cutaneous melanoma and melanoma cell lines is related to tumour progression and metastatic potential. Int J Cancer, 1995,64∶182-188.
6 Simon S, Dirk S, Karin H, et al. Expression of CD44 variant isoforms in malignant melanoma. Clin Cancer Res, 1996,2∶447., 百拇医药
单位：100044 北京医科大学人民医院皮肤科[陈秀琴 徐前喜 李荣 朱铁君(指导者)]，中心实验室(林文玉)
关键词：CD44V6；鳞状细胞癌；基底细胞瘤；恶性黑素瘤
中国皮肤科杂志980315 【摘要】目的 研究CD44V6在鳞状细胞癌、基底细胞癌和恶性黑素瘤的表达。方法 免疫组织化学对石蜡包埋组织标本进行检测。结果 10例鳞状细胞癌CD44V6膜表达阳性，且随癌细胞分化程度降低CD44V6表达下调。10例基底细胞癌和8例恶性黑素瘤不表达CD44V6。结论 CD44V6的表达与皮肤肿瘤的类型有关。
Expression of CD44V6 in Human Epidermal Tumours and Malignant Melanoma Chen Xiuqin,Xu Qianxi,Lin Wenyu,et al. Department of Dermatology, People's Hospital,Beijing Medical University, Beijing 100044
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【Abstract】 Objective To study the expression of CD44V6 in human epidermal tumours and malignant melanoma. Methods The expression of CD44V6 was detected by an immunohistochemical technique in squamous cell carcinoma(SCC), basal cell carcinoma(BCC) and malignant melanoma(MM). Results CD44V6 was expressed on the membrane of tumour cells of 10 patients with SCC, and there was downregulation of CD44V6 expression which along with the decrease of differentiation of SCC tumour cells. Tumour cells of 8 patients with MM and 10 patients with BCC did not express CD44V6. Conclusion Our findings suggest that CD44V6 expression is correlated with the types of skin tumours.
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【Key words】 CD44V6 Squamous cell carcinoma Basal cell carcinoma Malignant melanoma
CD44是一广泛分布的透膜糖蛋白，参与多种生理功能。最近，人们对其作为一粘附因子在某些肿瘤中的表达产生了极大的兴趣。鳞状细胞癌(鳞癌)与基底细胞癌(基癌)均是皮肤角朊细胞来源的肿瘤，恶性黑素瘤(恶黑)是恶性程度较高的肿瘤之一，CD44V6在这些肿瘤中的表达情况，国内尚未见报道，国外一些研究也在探索阶段。我们用免疫组织化学方法，用特异性单克隆抗CD44V6抗体检测了10例鳞癌、10例基癌、8例恶黑和10例交界痣中CD44V6的表达，以探讨CD44V6在角朊细胞来源的皮肤肿瘤和在侵袭性较强的恶黑中的表达情况。
材料和方法
1.标本：鳞癌10例、基癌10例、恶黑8例和交界痣10例，均为石蜡包埋标本，经病理学诊断确诊的患者，标本均为原发病灶，并且无转移。
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2.抗CD44V6抗体购自R&D公司、生物素化二抗和辣根过氧化物酶标链霉亲和素购自Dako公司。
3.方法：5μm厚的石蜡切片经脱蜡、水化及缓冲液冲洗(0.05mol/L Tris)加入0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液内，微波炉96℃～98℃加热修复10分钟。加1∶10小牛血清封闭非特异性抗原抗体结合，室温下30分钟，加入1∶100抗CD44V6抗体，4℃冰箱湿盒内过夜，加入1∶400酶标链霉亲合素DAB显色5～6分钟，切片入缓冲液冲洗，苏木素浅染细胞核，脱水、透明、封片。
4.判断标准：细胞膜有棕黄色颗粒状物质沉着者为CD44V6阳性表达细胞；细胞膜棕黄色颗粒染色深、细胞轮廓清晰为表达强；细胞膜棕黄色颗粒染色浅、细胞轮廓清晰度差为表达弱；无任何细胞着色为阴性。
结 果
1.鳞癌CD44V6的表达：10例鳞癌，HE染色，按Broders分级，Ⅰ级3例、Ⅱ级4例、Ⅲ级2例、Ⅳ级1例。做免疫组化染色光镜下观察到切片中未受累表皮细胞均有CD44V6膜表达，细胞膜呈明显棕黄色染色，各层细胞轮廓清晰，以基底层和棘细胞层染色稍强，可做为内对照。在各级鳞癌中，肿瘤细胞膜均表达CD44V6，呈棕黄色染色，但强弱程度有所不同，Ⅰ级和Ⅱ级鳞癌细胞膜棕黄色染色深，Ⅲ、Ⅳ级鳞癌细胞膜棕黄色染色浅，随鳞癌的分级增加CD44V6膜表达有下降趋势。同时观察到在同一级肿瘤中，肿瘤细胞分化好的部位细胞膜染色较深、细胞轮廓清晰；分化差的细胞细胞膜染色浅、细胞轮廓清晰度差。
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2.基癌CD44V6表达：10例基癌CD44V6免疫组化染色镜下观察发现肿瘤细胞膜基本无棕黄色染色，而相应未受累表皮细胞均有CD44V6表达，细胞膜呈棕黄色染色，各层细胞轮廓清晰，以基底层和棘细胞层染色稍强。
3.恶黑及交界痣CD44V6的表达：8例恶黑和10例交界痣，镜下发现黑素瘤细胞和痣细胞均无棕黄色染色，与之相应的未受累表皮可见细胞膜有棕黄色染色。
讨 论
CD44是一种透明质酸受体，它有几种不同类型，其中CD44V6与肿瘤发展有关。据报道，CD44V6的表达情况与肿瘤类型和组织来源有关。G
nthert[1]等研究发现在一些腺体肿瘤细胞例如胃肠道腺癌和乳腺癌细胞中CD44V6呈高水平表达。我们对鳞癌的CD44V6表达研究结果表明鳞癌呈阳性表达，这些结果与Simon[2]和Roye[3]对鳞癌和食道鳞癌CD44V6表达结果一致。Simon[2]和Roye[3]的实验仅对鳞癌CD44V6表达进行了定性分析，对鳞癌分级研究未见报道，而我们进行了各级鳞癌与CD44V6表达相关性的研究，实验结果发现随着肿瘤的分级程度增加，CD44V6膜表达有逐渐减低的趋势。从肿瘤细胞分化程度方面分析，分化好的细胞表达强、分化差的细胞表达弱。这些结果提示鳞癌分级与细胞的分化程度和CD44V6的表达程度有关，随着鳞癌分级增高和鳞癌细胞分化程度降低，CD44V6表达下调。这种随细胞分化程度降低CD44V6表达下调关系的研究，在一定程度上可以做为鳞癌分级的参考指标，并判断预后。正常表皮角朊细胞CD44V6表达与各级鳞癌表达程度的不同，显示出CD44V6可能在维持表皮细胞的正常结构和功能中起一定作用。由于我们目前研究的病例数有限，还需不断积累病例，以进一步研究。基癌的癌细胞基本不表达CD44V6，这与Simon[4]1996年对基癌CD44V6表达下调的研究结果相吻合。虽然正常基底细胞表达CD44V6，但在发展成癌细胞后，CD44V6结构改变或功能失活，从而不能与相应抗CD44V6抗体结合而表现为CD44V6免疫组化阴性。我们的实验结果显示恶黑的肿瘤细胞和交界痣细胞不表达CD44V6，而相应未受累表皮细胞仍清晰表达CD44V6。有人[5，6]对恶黑和交界痣CD44V6表达的研究也发现CD44V6在这两种细胞均无表达，说明恶黑的发生发展与CD44V6的表达无明显关系。, 百拇医药
参考文献
1 G
nthert U, Hoffman W, Rudy S, et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carinoma cells. Cell, 1991,65∶13-24.2 Simon JC, Heider KH, Dietrich A. Expression of CD44 isoforms in human skin cancer. Eur J Cancer, 1996,32∶1394-1400.
3 Roye GD, Myers RB, Drown D. CD44 expression in dysplastic epithelium and squamous cell carcinoma of the esophagus. Int J Cancer, 1996,69∶254-258.
, http://www.100md.com
4 Simon S, Wolfgang T, Karin H. Expression of CD44 splice variants in human skin and epidermal tumours. Virchows, 1996,428∶141-149.
5 Manten HE, Danen EH, Smit L. Expression of CD44 splice variants in human cutaneous melanoma and melanoma cell lines is related to tumour progression and metastatic potential. Int J Cancer, 1995,64∶182-188.
6 Simon S, Dirk S, Karin H, et al. Expression of CD44 variant isoforms in malignant melanoma. Clin Cancer Res, 1996,2∶447., 百拇医药