p21、p53及PCNA在人皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达
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作者：王宏伟 王秀丽 王椿森
单位：430022 武汉，同济医科大学附属协和医院皮肤科[王宏伟(现在上海市皮肤病性病防治中心) 王椿森]；湖北医科大学附属第一医院皮肤科(王秀丽)
关键词：
中华皮肤科杂志980616 为了探讨ras基因、p53基因及PCNA与基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)发生、发展的关系，我们采用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)连接系统，对10例BCC及10例SCC组织中p21、p53及PCNA蛋白表达进行了检测。
一、材料与方法
(一)材料：
1.标本：选择1986～1996年保存资料完整的10例BCC和10例SCC石蜡包埋组织共20份，均经HE染色明确诊断。SCC按Broders分类法将其分为Ⅰ～Ⅳ级，其中Ⅰ 级4例、Ⅱ 级4例、Ⅲ级2例。
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2.试剂：鼠抗人广谱p21单克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品；鼠抗人PCNA单克隆抗体为Sigma公司产品；SABC试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供；防脱片剂APES为Sigma公司产品。
(二)免疫组化染色：载玻片先以APES处理，石蜡包埋组织连续作厚4～5μm切片，切片经脱蜡、水化，再以3% H2O2灭活内源性酶、微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21、p53及PCNA单抗。4℃过夜，再滴加生物素化二抗及SABC复合物，以上每一步骤前均以0.1mol/L PBS缓冲液(pH7.4)充分浸洗标本，最后DAB显色、苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
(三)判断标准： 免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性。p21定位于胞浆及胞膜。p53及PCNA定位于细胞核。参照Garcia[1]的判断方法确定3种蛋白阳性反应细胞半定量分级：1细胞浅棕黄色着色为1，深棕色为2；2阳性着色细胞比例< 20%为1，20%～50%为2，>50%为3。以上两项相加等于2～3为(+)，3～4为(
)，≥4为(
)。统计学处理采用χ2检验。
, 百拇医药
二、结果
正常皮肤组织中无p21、p53表达，PCNA仅见于表皮基底层细胞，p21、p53及PCNA在BCC和SCC中的表达情况见附表，其中1例BCC及5例SCC同时出现p21、p53及PCNA阳性着色。
附表 p21、p53及PCNA在基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达 病 种
例数
p21染色
p53染色
PCNA染色
-
+
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-
+
-
+
基底细胞癌
10
9
0
1
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0
8
2
0
0
0
2
4
4
鳞状细胞癌
Ⅰ级
4
2
1
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1
0
2
2
0
0
0
3
1
0
Ⅱ级
4
0
1
, 百拇医药
3
0
1
1
2
0
0
0
4
0
Ⅲ级
2
0
0
, 百拇医药
0
2
0
0
0
2
0
0
0
2
三、讨论
我们检测10例BCC和10例SCC组织中p21蛋白阳性表达率分别为10%和80%，两者之间有显著性差异(P< 0.05)。说明BCC和SCC存在p21蛋白过度表达，且SCC明显多于BCC，这与Chesa认为分化好的肿瘤比分化差的肿瘤p21蛋白表达少的观点相一致[2]。在SCC不同病理分级中，肿瘤细胞p21着色强度与SCC病理分级呈正相关，说明p21着色强度与肿瘤细胞分化程度有关。
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本文结果显示BCC和SCC p53阳性表达率分别为20%和70%，两者之间有显著性差异(P< 0.05)。在SCC不同病理分级中，p53蛋白着色强度与分布亦有所不同。随SCC病理分级增高，p53蛋白阳性着色强度增强。Ⅰ、Ⅱ 级SCC的p53阳性细胞主要分布于癌巢边缘，角化区不出现p53阳性细胞，而2例Ⅲ级SCC则弥漫分布于肿瘤全层。提示突变型p53蛋白表达强度及分布部位可能与SCC的恶性程度有关。PCNA是一种仅在增殖细胞中合成的多肽，可较准确地反映细胞所处增殖状态[3]。本文中BCC和SCC均全部出现PCNA阳性着色，两者之间无显著性差异，提示BCC和SCC均存在肿瘤细胞的增殖，而BCC是一种恶性度低、很少发生转移的肿瘤，故认为PCNA只能反映细胞增殖状态和所处周期，而不能反映出细胞增殖的性质，用PCNA单一指标判断肿瘤的恶性程度及预后是不妥的。
参考文献
1 Garcia RL. Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues: comparison with flow cytometric analysis. Am J Pathol, 1989,134∶733-739.
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2 Chesa PG, Rettig WJ, Melamed MR, et al. Expression of p21ras in normal and malignant human tissues: Lack of association with proliferation and malignancy. Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84∶3234-3238.
3 Yu CCW, Fletcher CDM, Newman PL, et al. A comparison of PCNA immunostaining, AgNOR staining, and histological grading in gastrointestinal stromal tumours. J Pathol, 1992,166∶147-152.
(收稿：1997-09-22 修回：1998-01-26), 百拇医药
单位：430022 武汉，同济医科大学附属协和医院皮肤科[王宏伟(现在上海市皮肤病性病防治中心) 王椿森]；湖北医科大学附属第一医院皮肤科(王秀丽)
关键词：
中华皮肤科杂志980616 为了探讨ras基因、p53基因及PCNA与基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)发生、发展的关系，我们采用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)连接系统，对10例BCC及10例SCC组织中p21、p53及PCNA蛋白表达进行了检测。
一、材料与方法
(一)材料：
1.标本：选择1986～1996年保存资料完整的10例BCC和10例SCC石蜡包埋组织共20份，均经HE染色明确诊断。SCC按Broders分类法将其分为Ⅰ～Ⅳ级，其中Ⅰ 级4例、Ⅱ 级4例、Ⅲ级2例。
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2.试剂：鼠抗人广谱p21单克隆抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国Santa Cruz公司产品；鼠抗人PCNA单克隆抗体为Sigma公司产品；SABC试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供；防脱片剂APES为Sigma公司产品。
(二)免疫组化染色：载玻片先以APES处理，石蜡包埋组织连续作厚4～5μm切片，切片经脱蜡、水化，再以3% H2O2灭活内源性酶、微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本，然后分别滴加p21、p53及PCNA单抗。4℃过夜，再滴加生物素化二抗及SABC复合物，以上每一步骤前均以0.1mol/L PBS缓冲液(pH7.4)充分浸洗标本，最后DAB显色、苏木素轻度复染、脱水、透明、封片。用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
(三)判断标准： 免疫组化染色阳性为棕黄色，不着色为阴性。p21定位于胞浆及胞膜。p53及PCNA定位于细胞核。参照Garcia[1]的判断方法确定3种蛋白阳性反应细胞半定量分级：1细胞浅棕黄色着色为1，深棕色为2；2阳性着色细胞比例< 20%为1，20%～50%为2，>50%为3。以上两项相加等于2～3为(+)，3～4为(
)，≥4为()。统计学处理采用χ2检验。, 百拇医药
二、结果
正常皮肤组织中无p21、p53表达，PCNA仅见于表皮基底层细胞，p21、p53及PCNA在BCC和SCC中的表达情况见附表，其中1例BCC及5例SCC同时出现p21、p53及PCNA阳性着色。
附表 p21、p53及PCNA在基底细胞癌和鳞状细胞癌中的表达 病 种
例数
p21染色
p53染色
PCNA染色
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基底细胞癌
10
9
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2
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4
鳞状细胞癌
Ⅰ级
4
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Ⅱ级
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0
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4
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Ⅲ级
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2
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三、讨论
我们检测10例BCC和10例SCC组织中p21蛋白阳性表达率分别为10%和80%，两者之间有显著性差异(P< 0.05)。说明BCC和SCC存在p21蛋白过度表达，且SCC明显多于BCC，这与Chesa认为分化好的肿瘤比分化差的肿瘤p21蛋白表达少的观点相一致[2]。在SCC不同病理分级中，肿瘤细胞p21着色强度与SCC病理分级呈正相关，说明p21着色强度与肿瘤细胞分化程度有关。
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本文结果显示BCC和SCC p53阳性表达率分别为20%和70%，两者之间有显著性差异(P< 0.05)。在SCC不同病理分级中，p53蛋白着色强度与分布亦有所不同。随SCC病理分级增高，p53蛋白阳性着色强度增强。Ⅰ、Ⅱ 级SCC的p53阳性细胞主要分布于癌巢边缘，角化区不出现p53阳性细胞，而2例Ⅲ级SCC则弥漫分布于肿瘤全层。提示突变型p53蛋白表达强度及分布部位可能与SCC的恶性程度有关。PCNA是一种仅在增殖细胞中合成的多肽，可较准确地反映细胞所处增殖状态[3]。本文中BCC和SCC均全部出现PCNA阳性着色，两者之间无显著性差异，提示BCC和SCC均存在肿瘤细胞的增殖，而BCC是一种恶性度低、很少发生转移的肿瘤，故认为PCNA只能反映细胞增殖状态和所处周期，而不能反映出细胞增殖的性质，用PCNA单一指标判断肿瘤的恶性程度及预后是不妥的。
参考文献
1 Garcia RL. Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferative grade using anti PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues: comparison with flow cytometric analysis. Am J Pathol, 1989,134∶733-739.
, http://www.100md.com
2 Chesa PG, Rettig WJ, Melamed MR, et al. Expression of p21ras in normal and malignant human tissues: Lack of association with proliferation and malignancy. Proc Natl Acad Sci USA, 1987,84∶3234-3238.
3 Yu CCW, Fletcher CDM, Newman PL, et al. A comparison of PCNA immunostaining, AgNOR staining, and histological grading in gastrointestinal stromal tumours. J Pathol, 1992,166∶147-152.
(收稿：1997-09-22 修回：1998-01-26), 百拇医药