儿茶素对肝药酶和CCl4急性肝损伤的影响
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作者：黄仁彬 臧林泉 梁 钢 林 兴 王乃平
单位：广西医科大学药理学教研室(南宁市滨湖路 530021)
关键词：没食子儿茶素没食子酸酯；细胞色素P450；细胞色素b5；苯胺羟化酶；CCl4肝损伤
广西中医学院学报990371 摘 要 【目的】研究儿茶素没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝药酶和CCl4急性肝损伤的影响。【方法】通过测定细胞色素P450(P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)的含量及苯胺羟化酶的活性来观察EGCG对肝药酶的作用和研究EGCG对小鼠CCl4急性肝损伤的影响。【结果】EGCG明显降低P450和Cyt.b5的含量及提高苯胺羟化酶的活性，加重CCl4引起的急性肝损伤。【结论】EGCG对多数P450亚族具有显著的抑制作用，而可能通过诱导P4502E1从而增加CCl4的肝毒性。
, 百拇医药
中图分类号 R285.5
Effects of EGCG on hepatic microsomal drug-metabolizing enzyme and CCl4-induced liver injury
Huang Renbin, Zang linquan,Liang Gang,Lin Xing,Wang Naiping
(Department of Pharmacology,Guangxi Medical University, Nanning,530021)
Abstract 【Objective】 To study the effect of Epigallocatechin gallate(EGCG)on hepatic microsomal drugmetabolizing enzyme and CCl4-induced liver injury. 【Methods】 The effect of EGCG on hepatic microsomal drugmetabolizing enzyme was investigated by the determination of cytochrome P450(P450) and cytochrome b5 (Cyt.b5)contents, and aniline hydroxylase activity, and the effect of EGCG on CCl4-induced liver injury in mice was observed. 【Results】 The contents of P450 and Cyt.b5 were reduced, the activity of aniline hydroxylase was elevated, and the acute liver injury indced by CCl4 was aggravated markedly by the treatment with EGCG.【Conclusion】 Most of P450 subforms was significantly inhibited by EGCG,and CCl4hepatotoxicity was increased by it, probably as a result of induction of P4502E1.
, 百拇医药
Key words Epigallocatechin gallate；cytochrome P450;cytochrome b5;aniline hydroxylase; CCl4-induced liver injury
绿茶中的茶多酚具有抗突变、降血脂、抗菌和抑制人体艾滋病毒等作用〔1，2〕。从茶多酚中进一步提取纯化的儿茶素(简称EGCG)、表没食子儿茶素(Epigallocatechin, 简称EGC)和儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate, 简称ECG)具有抗氧化和抗肿瘤等作用〔1〕。但儿茶素对肝药酶和CCl4急性肝损伤的影响尚未见报道。为此，本文用CCl4引起的急性肝损伤的动物模型，通过测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、P450、苯胺羟化酶等的含量或活性以观察EGCG对肝药酶和CCl4肝毒性的影响，并探讨其对CCl4肝损伤作用有关的机制。此外，通过研究ECCG对肝药酶的作用，以探讨其防癌作用是否与P450有关。
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1 材料
1.1 受试药物 EGCG，由广西医科大学化学教研室雷耀兴教授从广西绿茶中提取并提供。实验时用蒸馏水配制成所需的药液供动物灌胃用。
1.2 试剂 苯巴比妥钠，每支0.1克，上海中国第八制药厂生产，批号：79110624；联二亚硫酸钠(保险粉，Na2S2O4)，广东汕头新宁化工厂出品，批号：920816，辅酶Ⅱ(NADPH)，上海丽珠东风生物技术有限公司出品，批号：3007。
1.3 仪器 美国Beckman DU-640紫外可见光分光光度计
1.4 动物 Wistar小鼠，体重22～28克，雌雄兼用，由广西医科大学实验动物中心提供。
1.5 统计方法 用t检验比较组间差异的显著性。P450和Cyt.b5含量用nmol/g liver(肝)及苯胺羟化酶活性用nmol/g liver/min(分钟)表示。由于每组小鼠肝重有明显差异，故同时用nmol/100g体重(b.w.)或nmol/100g b.w./min，以充分反映肝脏的功能。
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2 方法与结果
2.1 EGCG对正常小鼠肝药酶的影响
2.1.1 动物处理和肝微粒体制备〔6〕
将小鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥组(80mg/kg, i.p.)、EGCG 3个剂量组(分别为240mg/kg,120mg/kg，70mg/kg,i.g.)。动物每天给药1次，连续8天。于给药第9天拔眼球取血处死，取肝称重(结果见表1)。肝脏用2倍肝重量的15%甘油-20mMPBS(磷酸缓冲液，pH7.4)匀浆、3000rpm离心10min，取上清液即得肝微粒体(MS)。
表1 EGCG对肝系数的影响 (
±s) 组别
动物数
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剂量(mg/kg)
肝系数(g/100g b.w.)
空白对照
15
—
5.35±0.64
苯巴比妥
10
80
6.42±0.89**
EGCG
15
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60
5.22±0.53
EGCG
15
120
4.98±0.97
EGCG
14
240
4.85±0.56*
注：与空白对照组比较：*P<**P<0.01
2.1.2 P450和Cyt.b5含量测定
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先用Beckman DU-640紫外可见光分光光度计扫描待测样品(100μlMS+2ml15%甘油-20mMBPS)，以得扫描基线(调零)，然后在比色杯中加入数mgNa2S2O4,于400～500nm处扫描即得到还原型Cyt.b5的吸收光谱曲线，记录430nm和490nm处OD值〔3，7〕；调零，向比色杯中通入适量一氧化碳(CO)30sec，于400～500nm处扫描即得到P450的吸收光谱曲线，记录450nm、420nm和490nm处OD值〔6〕。结果表明，120mg/kg和240mg/kg剂量的EGCE明显降低P450的含量，尤以120mg/kg剂量组作用显著。EGCG对Cyt.b5的作用较弱，其中120mg/kg剂量组与空白对照组比较具有显著性差异(结果见表2)。
表2 EGCG对P450和Cyt.b5含量的影响 (±s) 组别
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动物数
剂量
(mg/kg)
P450
Cyt.b5
(nmol/g liver)
(nmol/100 g b.w.)
(nmol/g liver)
(nmol/100 g b.w.)
空白对照
15
—
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0.049±0.011
0.261±0.054
0.111±0.030
0.538±0.200
苯巴比妥
10
80
0.083±0.017**
0.536±0.134**
0.100±0.044
0.662±0.117
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EGCG
15
60
0.045±0.017
0.241±0.104
0.116±0.043
0.606±0.229
EGCG
15
120
0.038±0.012**
0.194±0.063**
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0.071±0.042*
0.347±0.189*
EGCG
14
240
0.040±0.010*
0.193±0.049**
0.105±0.042
0.503±0.198
注：与空白对照组比较：*P<0.05**P<0.01
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2.1.3 苯胺羟化酶的测定〔4〕
取MS 200μl，?200mM苯胺25μl，10mMNADPH25μl;37℃水浴中保温30min后，加入20%TCA(三氯醋酸)，离心10min(300rpm),取上清液0.5ml,依次加入10%Na2CO30.25ml,试剂B(2ml 苯酚，0.8gNaOH,加水至100ml)0.5ml,37℃水浴保温30min后，用Beckman DU-640紫外可见光分光光度计以630nm测定其OD值。结果表明，3个剂量组的EGCG均能显著提高小鼠肝细胞苯胺羟化酶的活性(结果见表3)。
表3 EGCG对苯胺羟化酶的影响 (±s) 组别
动物数
, 百拇医药
剂量
(mg/kg)
苯胺羟化酶
(nmol/g liver/min)
(nmol/100g b.w./min)
空白对照
8
—
0.189±0.092
1.023±0.545
苯巴比妥
7
, 百拇医药
80
0.484±0.213**
2.967±1.338**
EGCG
8
60
0.512±0.125**
2.739±0.752**
EGCG
6
120
, 百拇医药
0.475±0.109**
2.407±0.598**
EGCG
8
240
0.370±0.152*
1.868±0.960
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
2.2 ECGC对急性肝损伤的影响
2.2.1 动物处理和肝微粒体制备 将小鼠随机分为空白对照组，CCl4对照组，EGCG120mg/kg和240mg/kg剂量组。EGCG组每天给药1次，连续5天；于给药第4天，除空白对照组外，每组腹腔注射(i.p.)CCl4400μl/kg。24h后将动物拔眼球取血处死，取肝称重(结果为组间肝系数无显著性差异)，按2.1.1项制备肝微粒体。
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2.2.2 P450的含量测定 按上述方法测定P450和Cyt.b5。结果表明，EGCG120mg/kg组和CCl4对照组的P450含量明显降低，与空白对照组比较具有显著性差异(结果见表4)。
表4 EGCG对CCl4小鼠急性肝损伤小鼠P450含量的影响 (±s) 组别
动物数
剂量
(mg/kg)
P450
(nmol/g liver)
(nmol/100g b.w.)
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空白对照
8
—
0.039±0.010
0.196±0.058
CCl4
10
—
0.025±0.007**
0.141±0.038*
EGCG
9
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120
0.023±0.007**
0.122±0.041*
EGCG
9
240
0.026±0.012**
0.135±0.063**
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
2.2.3 ALT和AST的测定
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按赖氏法测定ALT和AST。结果表明，注射CCl4 24h后肝组织和肝功能明显受损，ALT和AST显著升高。EGCG显著地提高血清ALT水平，ECGC两个剂量组的ALT水平与CCl4对照组比较具有显著性差异(结果见表5)。
表5 EGCG对急性肝损伤ALT和AST的影响 (±s) 组别
动物数
剂量
(mg/kg)
ALT(U/T)
AST(U/L)
空白对照
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5
—
63.0±24.7**
100.0±24.0**
CCl4组
10
—
616.0±282.9
858.6±101.6
EGCG
9
120
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1151.0±309.7*
917.0±300.6
EGCG
9
240
1149.4±246.9**
913.9±130.7
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
3 讨论
P450是肝药酶中最重要的酶系，参与各种外源物(如药物、化学毒物、致癌物等)和内源物(如类固醇激素、Vit.D、胆酸等)在体内代谢过程。P450中现已知有70多种药物代谢酶分别催化不同物质的生物转化。酶活性的高低直接影响到物质代谢的速度。本实验通过测定P450和Cyt.b5的含量及测定苯胺的生物转化速度来探讨儿茶素EGCG对代谢酶的影响。结果发现，EGCG尤其是120mg/kg剂量组明显降低正常小鼠P450和Cyt.b5的含量，说明EGCG对大多数P450亚族具有抑制作用，从而降低许多物质的生物转化速度；相反地，苯胺羟化酶的测定结果表明，EGCG能增强苯胺羟化酶的活性，提高苯胺的生物转化速度。现已知苯胺羟化酶对P4502E1亚族是相对特异性的〔5〕，给予EGCG后苯胺羟化酶活性显著提高，从而间接地反映EGCG对P4502E1亚族具有明显的诱导作用。EGCG对CCl4急性肝损伤影响的实验结果表明，EGCG明显加重CCl4急性肝损伤，两个剂量组的血清ALT水平显著高于CCl4对照组。CCl4是一种肝毒剂，在肝中经P4502E1转化为三氯甲基自由基(CCl3。)，通过氢吸附而攻击内质网膜上的磷脂分子，引起膜的脂质过氧化，CCl3。继而与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，引起膜结构和功能完整性的破坏〔8，9〕，从而引起细胞和P450分子损伤，引起血清ALT和AST活性升高，P450含量降低和肝细胞变性坏死。众所周知，苯巴比妥通过诱导P4502E1而加重CCl4肝毒性〔5〕，EGCG虽然降低P450含量和抑制许多物质的代谢，但其可能同苯巴比妥一样通过诱导P4502E1亚族而加促CCl4转化为CCl3。，从而加重肝损伤的程度。一些研究发现某些物质经P4502E1转化为致癌的代谢物而导致组织癌变，对P4502E1的诱导或抑制可以影响致癌作用，如苯巴比妥通过诱导P4502E1而促进黄曲霉素的致癌作用。本研究结果揭示EGCG可诱导P4502E1，表明茶多酚的防癌作用可能与P450无关，其作用机制尚待进一步研究。
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*广西壮族自治区科学研究与技术开发计划课题，编号：桂科攻9817091
参考文献
〔1〕于新蕊，曲军，丛月珠.茶叶的化学成分及药理作用研究.中草药，1995，26(4)：219
〔2〕郑青山，赵振东，栾家杰.茶多酚治疗鹌鹑高血脂模型的实验研究.现代应用药学，1994，11(6)：8
〔3〕候艳宁，胡文羽，李亚伟，等.黄芩甙对小鼠微粒体细胞色素P450的诱导.中国药理学会通讯.1998，15(3)：60～62
〔4〕Imai Y, Ito A and Sato R.Evidence for biochemically different types of vesicles in the hepatic microsomal faction.J Biochem.1996,60:417～428
, 百拇医药
〔5〕Huang R,Okuno H,Takasu M, Shiozaki Y,Inoue K. Comparison of effects xenobiotics on extrahepatic and hepatic microsomal drug-metabolizing enzymes in mice. Environ Toxicol and Pharmacol.1996,1:123～130
〔6〕Omura T and Sato R.The carbon monoxide binding pigment of liver microsomes. J Biol Chem.1964,239:2370～2385
〔7〕Omura T and Takesue S, A new method for simulataneous purification of cytochrome b5 and NADPH-cytochrome c reductase from rat liver microsomes. J biochem.1970,67:249～257
〔8〕Recknagel RO.Carbon tetrachloride hepatotoxicity:an example of lethal cleavage. CRC Crit.Rew.Toxicol.1973,2:263～268
〔9〕Williams AT and Burk RF.Carbon tetrachloride hepatotoxicity:an example of free radical-mediated injury. Seminars Liver Dis.1990,(10):279～282
收稿日期：1999-06-26, 百拇医药
单位：广西医科大学药理学教研室(南宁市滨湖路 530021)
关键词：没食子儿茶素没食子酸酯；细胞色素P450；细胞色素b5；苯胺羟化酶；CCl4肝损伤
广西中医学院学报990371 摘 要 【目的】研究儿茶素没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝药酶和CCl4急性肝损伤的影响。【方法】通过测定细胞色素P450(P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)的含量及苯胺羟化酶的活性来观察EGCG对肝药酶的作用和研究EGCG对小鼠CCl4急性肝损伤的影响。【结果】EGCG明显降低P450和Cyt.b5的含量及提高苯胺羟化酶的活性，加重CCl4引起的急性肝损伤。【结论】EGCG对多数P450亚族具有显著的抑制作用，而可能通过诱导P4502E1从而增加CCl4的肝毒性。
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中图分类号 R285.5
Effects of EGCG on hepatic microsomal drug-metabolizing enzyme and CCl4-induced liver injury
Huang Renbin, Zang linquan,Liang Gang,Lin Xing,Wang Naiping
(Department of Pharmacology,Guangxi Medical University, Nanning,530021)
Abstract 【Objective】 To study the effect of Epigallocatechin gallate(EGCG)on hepatic microsomal drugmetabolizing enzyme and CCl4-induced liver injury. 【Methods】 The effect of EGCG on hepatic microsomal drugmetabolizing enzyme was investigated by the determination of cytochrome P450(P450) and cytochrome b5 (Cyt.b5)contents, and aniline hydroxylase activity, and the effect of EGCG on CCl4-induced liver injury in mice was observed. 【Results】 The contents of P450 and Cyt.b5 were reduced, the activity of aniline hydroxylase was elevated, and the acute liver injury indced by CCl4 was aggravated markedly by the treatment with EGCG.【Conclusion】 Most of P450 subforms was significantly inhibited by EGCG,and CCl4hepatotoxicity was increased by it, probably as a result of induction of P4502E1.
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Key words Epigallocatechin gallate；cytochrome P450;cytochrome b5;aniline hydroxylase; CCl4-induced liver injury
绿茶中的茶多酚具有抗突变、降血脂、抗菌和抑制人体艾滋病毒等作用〔1，2〕。从茶多酚中进一步提取纯化的儿茶素(简称EGCG)、表没食子儿茶素(Epigallocatechin, 简称EGC)和儿茶素没食子酸酯(Epicatechin gallate, 简称ECG)具有抗氧化和抗肿瘤等作用〔1〕。但儿茶素对肝药酶和CCl4急性肝损伤的影响尚未见报道。为此，本文用CCl4引起的急性肝损伤的动物模型，通过测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、P450、苯胺羟化酶等的含量或活性以观察EGCG对肝药酶和CCl4肝毒性的影响，并探讨其对CCl4肝损伤作用有关的机制。此外，通过研究ECCG对肝药酶的作用，以探讨其防癌作用是否与P450有关。
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1 材料
1.1 受试药物 EGCG，由广西医科大学化学教研室雷耀兴教授从广西绿茶中提取并提供。实验时用蒸馏水配制成所需的药液供动物灌胃用。
1.2 试剂 苯巴比妥钠，每支0.1克，上海中国第八制药厂生产，批号：79110624；联二亚硫酸钠(保险粉，Na2S2O4)，广东汕头新宁化工厂出品，批号：920816，辅酶Ⅱ(NADPH)，上海丽珠东风生物技术有限公司出品，批号：3007。
1.3 仪器 美国Beckman DU-640紫外可见光分光光度计
1.4 动物 Wistar小鼠，体重22～28克，雌雄兼用，由广西医科大学实验动物中心提供。
1.5 统计方法 用t检验比较组间差异的显著性。P450和Cyt.b5含量用nmol/g liver(肝)及苯胺羟化酶活性用nmol/g liver/min(分钟)表示。由于每组小鼠肝重有明显差异，故同时用nmol/100g体重(b.w.)或nmol/100g b.w./min，以充分反映肝脏的功能。
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2 方法与结果
2.1 EGCG对正常小鼠肝药酶的影响
2.1.1 动物处理和肝微粒体制备〔6〕
将小鼠随机分为空白对照组、苯巴比妥组(80mg/kg, i.p.)、EGCG 3个剂量组(分别为240mg/kg,120mg/kg，70mg/kg,i.g.)。动物每天给药1次，连续8天。于给药第9天拔眼球取血处死，取肝称重(结果见表1)。肝脏用2倍肝重量的15%甘油-20mMPBS(磷酸缓冲液，pH7.4)匀浆、3000rpm离心10min，取上清液即得肝微粒体(MS)。
表1 EGCG对肝系数的影响 (
±s) 组别动物数
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剂量(mg/kg)
肝系数(g/100g b.w.)
空白对照
15
—
5.35±0.64
苯巴比妥
10
80
6.42±0.89**
EGCG
15
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60
5.22±0.53
EGCG
15
120
4.98±0.97
EGCG
14
240
4.85±0.56*
注：与空白对照组比较：*P<**P<0.01
2.1.2 P450和Cyt.b5含量测定
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先用Beckman DU-640紫外可见光分光光度计扫描待测样品(100μlMS+2ml15%甘油-20mMBPS)，以得扫描基线(调零)，然后在比色杯中加入数mgNa2S2O4,于400～500nm处扫描即得到还原型Cyt.b5的吸收光谱曲线，记录430nm和490nm处OD值〔3，7〕；调零，向比色杯中通入适量一氧化碳(CO)30sec，于400～500nm处扫描即得到P450的吸收光谱曲线，记录450nm、420nm和490nm处OD值〔6〕。结果表明，120mg/kg和240mg/kg剂量的EGCE明显降低P450的含量，尤以120mg/kg剂量组作用显著。EGCG对Cyt.b5的作用较弱，其中120mg/kg剂量组与空白对照组比较具有显著性差异(结果见表2)。
表2 EGCG对P450和Cyt.b5含量的影响 (
±s) 组别, 百拇医药
动物数
剂量
(mg/kg)
P450
Cyt.b5
(nmol/g liver)
(nmol/100 g b.w.)
(nmol/g liver)
(nmol/100 g b.w.)
空白对照
15
—
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0.049±0.011
0.261±0.054
0.111±0.030
0.538±0.200
苯巴比妥
10
80
0.083±0.017**
0.536±0.134**
0.100±0.044
0.662±0.117
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EGCG
15
60
0.045±0.017
0.241±0.104
0.116±0.043
0.606±0.229
EGCG
15
120
0.038±0.012**
0.194±0.063**
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0.071±0.042*
0.347±0.189*
EGCG
14
240
0.040±0.010*
0.193±0.049**
0.105±0.042
0.503±0.198
注：与空白对照组比较：*P<0.05**P<0.01
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2.1.3 苯胺羟化酶的测定〔4〕
取MS 200μl，?200mM苯胺25μl，10mMNADPH25μl;37℃水浴中保温30min后，加入20%TCA(三氯醋酸)，离心10min(300rpm),取上清液0.5ml,依次加入10%Na2CO30.25ml,试剂B(2ml 苯酚，0.8gNaOH,加水至100ml)0.5ml,37℃水浴保温30min后，用Beckman DU-640紫外可见光分光光度计以630nm测定其OD值。结果表明，3个剂量组的EGCG均能显著提高小鼠肝细胞苯胺羟化酶的活性(结果见表3)。
表3 EGCG对苯胺羟化酶的影响 (
±s) 组别动物数
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剂量
(mg/kg)
苯胺羟化酶
(nmol/g liver/min)
(nmol/100g b.w./min)
空白对照
8
—
0.189±0.092
1.023±0.545
苯巴比妥
7
, 百拇医药
80
0.484±0.213**
2.967±1.338**
EGCG
8
60
0.512±0.125**
2.739±0.752**
EGCG
6
120
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0.475±0.109**
2.407±0.598**
EGCG
8
240
0.370±0.152*
1.868±0.960
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
2.2 ECGC对急性肝损伤的影响
2.2.1 动物处理和肝微粒体制备 将小鼠随机分为空白对照组，CCl4对照组，EGCG120mg/kg和240mg/kg剂量组。EGCG组每天给药1次，连续5天；于给药第4天，除空白对照组外，每组腹腔注射(i.p.)CCl4400μl/kg。24h后将动物拔眼球取血处死，取肝称重(结果为组间肝系数无显著性差异)，按2.1.1项制备肝微粒体。
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2.2.2 P450的含量测定 按上述方法测定P450和Cyt.b5。结果表明，EGCG120mg/kg组和CCl4对照组的P450含量明显降低，与空白对照组比较具有显著性差异(结果见表4)。
表4 EGCG对CCl4小鼠急性肝损伤小鼠P450含量的影响 (
±s) 组别动物数
剂量
(mg/kg)
P450
(nmol/g liver)
(nmol/100g b.w.)
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空白对照
8
—
0.039±0.010
0.196±0.058
CCl4
10
—
0.025±0.007**
0.141±0.038*
EGCG
9
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120
0.023±0.007**
0.122±0.041*
EGCG
9
240
0.026±0.012**
0.135±0.063**
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
2.2.3 ALT和AST的测定
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按赖氏法测定ALT和AST。结果表明，注射CCl4 24h后肝组织和肝功能明显受损，ALT和AST显著升高。EGCG显著地提高血清ALT水平，ECGC两个剂量组的ALT水平与CCl4对照组比较具有显著性差异(结果见表5)。
表5 EGCG对急性肝损伤ALT和AST的影响 (
±s) 组别动物数
剂量
(mg/kg)
ALT(U/T)
AST(U/L)
空白对照
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5
—
63.0±24.7**
100.0±24.0**
CCl4组
10
—
616.0±282.9
858.6±101.6
EGCG
9
120
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1151.0±309.7*
917.0±300.6
EGCG
9
240
1149.4±246.9**
913.9±130.7
注：与空白对照组比较：*P<0.05 **P<0.01
3 讨论
P450是肝药酶中最重要的酶系，参与各种外源物(如药物、化学毒物、致癌物等)和内源物(如类固醇激素、Vit.D、胆酸等)在体内代谢过程。P450中现已知有70多种药物代谢酶分别催化不同物质的生物转化。酶活性的高低直接影响到物质代谢的速度。本实验通过测定P450和Cyt.b5的含量及测定苯胺的生物转化速度来探讨儿茶素EGCG对代谢酶的影响。结果发现，EGCG尤其是120mg/kg剂量组明显降低正常小鼠P450和Cyt.b5的含量，说明EGCG对大多数P450亚族具有抑制作用，从而降低许多物质的生物转化速度；相反地，苯胺羟化酶的测定结果表明，EGCG能增强苯胺羟化酶的活性，提高苯胺的生物转化速度。现已知苯胺羟化酶对P4502E1亚族是相对特异性的〔5〕，给予EGCG后苯胺羟化酶活性显著提高，从而间接地反映EGCG对P4502E1亚族具有明显的诱导作用。EGCG对CCl4急性肝损伤影响的实验结果表明，EGCG明显加重CCl4急性肝损伤，两个剂量组的血清ALT水平显著高于CCl4对照组。CCl4是一种肝毒剂，在肝中经P4502E1转化为三氯甲基自由基(CCl3。)，通过氢吸附而攻击内质网膜上的磷脂分子，引起膜的脂质过氧化，CCl3。继而与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，引起膜结构和功能完整性的破坏〔8，9〕，从而引起细胞和P450分子损伤，引起血清ALT和AST活性升高，P450含量降低和肝细胞变性坏死。众所周知，苯巴比妥通过诱导P4502E1而加重CCl4肝毒性〔5〕，EGCG虽然降低P450含量和抑制许多物质的代谢，但其可能同苯巴比妥一样通过诱导P4502E1亚族而加促CCl4转化为CCl3。，从而加重肝损伤的程度。一些研究发现某些物质经P4502E1转化为致癌的代谢物而导致组织癌变，对P4502E1的诱导或抑制可以影响致癌作用，如苯巴比妥通过诱导P4502E1而促进黄曲霉素的致癌作用。本研究结果揭示EGCG可诱导P4502E1，表明茶多酚的防癌作用可能与P450无关，其作用机制尚待进一步研究。
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*广西壮族自治区科学研究与技术开发计划课题，编号：桂科攻9817091
参考文献
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收稿日期：1999-06-26, 百拇医药