当前位置: 首页 > 医学版 > 期刊论文 > 大学学报(医药卫生) > 广西医科大学学报
编号:10292654
没食子酰表没食子儿茶素抗肿瘤作用的研究
http://www.100md.com 37c医学网

     作者:梁钢 黄仁彬 黄志明 符麟军

    单位:广西医科大学药理学教研室 南宁 530021

    关键词:没食子酰表没食子儿茶素;小鼠肝癌;小鼠肉瘤180;抗肿瘤

    广西医科大学学报000203

    摘要 目的:了解没食子酰表没食子儿茶素(EGCG)抗肿瘤作用。方法:用小鼠肉瘤180(S-180)、小鼠肝癌(Hep)为瘤株,对EGCG进 行体内外抗肿瘤药效试验和观察其对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。结果:EGCG灌胃80、40 mg/kg.d-1,连续7 d,对小鼠移植 性S-180实体瘤有明显抑制作用;80 mg/kg.d-1可延长Hep腹水癌小鼠生命;160、 80、40、20 mg/L的EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制;160、80、40、20、1 0 mg/L的EGCG可完全或部分灭活Hep瘤苗;除10 mg/L浓度组外,其余各浓度组亦可部分灭 活S-180瘤苗;80、40 mg/kg可增加荷瘤小鼠胸腺重量。结论:EGCG在实验条件下有一定抗肿瘤作用,能延缓免疫器官衰退 。

    中国图书资料分类法分类号 R965.1

    STUDY OF ANTITUMOR EFFECT OF (-) EPIGALLOCATECHIN GALLATE

    Liang Gang,Huang Renbin,Huang Zhiming

    (Department of Pharmacology, Guangxi Medical University,Nanning 530021,China)

    Abstract Objective:The purpose of this study was to understan d the anti-tumor effect of (-) epigallocatechin gattate,EGCG.Methods:The pharmacodynamic test of EGCG on sarcoma 180(S-180 ) hepato cacinoma (Hep)in mice or in vitro and the effect of EGCG on the weight of immunic organ of mice implanted tumor were observed.Results:The finding showed that the growth of transplanted S- 180 was significantly inhibited and that the lifetime of mice with Hepascitic ca rcinoma could be prolonged when EGCG were administered intragastioly to mice for 7days.EGCG could significantly inhibited the living cells of S-180 and Hep in vitro and decrease the rate of implant on tumor cells to mice.In addition,EGCG could also increase the weight of thymus in mice with tumor.Conclusion:These results suggested that EGCG have antitumor ef fect and can delay immunic organ failure.

    Key words (-)epigallocatechin;EGCG;hepatocacinoma;sarcoma1 80;antitumor

    从绿茶提取的多酚化合物(Polyphenol compunds)中含有多种儿茶素(Catechin)。这些 儿茶素类物质中包括多种(+)儿茶素和(-)表儿茶素[(-)-Epicatechin,EC]。它们具有多 种生理功能,如抗氧化、清除自由基、抗衰老等作用[1,2]。近来有研究还表明, 绿茶或茶多酚具有明显的防癌和抗癌作用,能诱导肿瘤细胞凋亡和延缓荷瘤动物免疫器官衰 退的作用[3~7]。为进一步确定绿茶多酚类提取物的抗肿瘤作用是否和其中的表儿 茶素主要成分有关,本实验直接用纯的没食子酰表没食子儿茶素(-)-(Epigallocatechin gallate,EGCG),观察其体内外抗小鼠肿瘤的作用和对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。

    1 材 料

    1.1 药物:没食子酰表没食子儿茶素(Epigallocatechingallate,EGCG),纯度>98%,由广西医科大学化学教研室提供。注射用环磷酰胺(CTX),200mg/瓶,上海华联制药有限公司(961111)产品。

    1.2 动物:昆明种小白鼠,广西医科大学实验动物中心提供,普通级。

    1.3 瘤株:小鼠肝癌(Hep),小鼠肉瘤(S-180)由广西肿瘤防治研究所药理室提供。

    1.4 培养液:RPMI-1640;Hank's液。

    2 方法与结果

    2.1 对小鼠移值性S-180实体瘤的影响:选取健康小鼠50只,体质量18~21g。每鼠右腋窝皮下接种1∶3S-180细胞悬液0.2ml,次日称重后随机分成5组,每组10只,雌雄各半。各组给药剂量及途径:阴性对照组给生理盐水(NS),阳性对照组隔日给CTX20mg/kg,EGCG高、中、低剂量组分别给120、60、30mg/kg,灌胃给药,每天1次,连续给药7d。

    给药结 束后次日处死小鼠,然后剥取瘤块并称重,计算其抑瘤率[8]。按同样方法重复试 验一次。结果:EGCG高、中剂量组平均瘤重低于阴性对照组(P<0.05),但低剂量与阴 性对照组比较无显著差异;重复试验结果相同。提示对小鼠移植性S-180实体瘤有抑制作用 ,见表1。

    2.2 对小鼠移植性Hep腹水瘤的影响:选取健康小鼠75只,体质量18~21 g,雌雄各半,每 鼠腹腔接种1∶3 Hep细胞悬液0.2 ml,次日根据性别、体质量随机分成5组,分组及给药方 法同实验1。给药结束后记录各组动物存活时间,计算生命延长率[8]。重复实验两 次。 结果:EGCG高剂量组的平均存活时间与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05);重复 试验结果相同。表明EGCG有一定延长Hep腹水癌小鼠生命的作用,见表2。

    2.3 对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响(台盼蓝染色法):将EGCG用细胞培养液(RPMI 1640)按实验所需浓度逐管稀释为5个浓度,用细胞培养液将S-180和Hep瘤细胞制成细胞悬 液,空白对照用等量细胞培养液稀释。置37℃温育6 h,台盼蓝染色计数瘤细胞蓝染率,与 对照组比较,计算抑瘤率[9,10]。结果如表3所示,EGCG 5个浓度组的S-180和Hep 瘤细胞的蓝染率均明显高于空白对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性地递增,在对应浓 度组中,以Hep瘤细胞蓝染率高于S-180。对S-180和Hep的50%抑瘤浓度(IC50)分别为40 mg /L和20 mg/L。提示EGCG对S-180和Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制作用。

    2.4 对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响:制备的S-180和Hep瘤细胞悬液浓度及EGCG浓度 比同实验3。将不含和含上述5个浓度比的EGCG瘤细胞悬液置37℃温育1.5 h,制成瘤苗。按 每鼠3×106个/0.1 ml瘤细胞的量,接种S-180瘤苗于小鼠右腋窝皮下,Hep瘤苗则接种 于小鼠腹腔,两瘤种各剂量组每组接种10只,观察其是否发病。按同样方法重复试验1次。 结果如表4,20至160 mg/L的EGCG可部分灭能S-180瘤苗,灭能作用随EGCG剂量增加而增强 ,10 mg/L的EGCG对S-180瘤苗无灭能作用,两实验结果相同;对于Hep瘤苗,第1次实验16 0 mg/L的EGCG组可完全灭能,第二次实验80 mg/L EGCG组也可完全灭能瘤苗,其余EGCG浓度 组仅能部分灭能瘤苗,灭能作用亦随剂量增加而增强。对照组两次实验均无灭能S-180和He p瘤苗作用。提示EGCG对S-180和Hep瘤苗活性有抑制作用。

    2.5 对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响:给药方式,EGCG剂量和给药时间同实验1,于接种S -180荷瘤小鼠停药24 h后称体质量和胸腺、脾脏的湿重,按文献[8]计算胸腺指数 和脾指数。结果:EGCG大、中剂量组的胸腺指数较阴性对照组明显增加(P<0.01或0.0 5),低剂量组无显著差异;3个EGCG剂量组的脾脏指数与阴性对照组比较,无显著差异;CTX 组的胸腺和脾脏指数均低于阴性对照组(P<0.01)。提示:EGCG可增加S-180荷瘤小鼠 胸腺重量,见表5。

    表1 EGCG对小鼠移植性S-180实体瘤的影响(±s) 实验

    次数

    组别

    药量

    (mg/kg)

    动物数

    (始/末)

    瘤重

    (m/g)

    抑 瘤率

    (%)

    1

    NS

    /

    10/10

    1.24±0.51

    CTX

    20

    10/10

    0.70±0.26**

    43.5

    EGCG

    80

    10/10

    0.76±0.30*

    38.7

    EGCG

    40

    10/10

    0.85±0.39*

    31.5

    EGCG

    20

    10/10

    0.94±0.29

    24.2

    2

    NS

    /

    10/10

    1.19±0.32

    CTX

    20

    10/10

    0.64±0.23**

    46.2

    EGCG

    80

    10/10

    0.70±0.20**

    41.2

    EGCG

    40

    10/10

    0.72±0.29**

    39.5

    EGCG

    20

    10/10

    0.99±0.34

    16.8

    与阴性对照组比较,*P<0.05,**P<0.01表2、EGCG对小鼠移植性Hep腹水瘤影响(±s) 实验

    次数

    组别

    药量

    (mg/kg)

    动物数

    (n)

    平均生存时间

    (t/d )

    生命延长

    率(%)

    1

    NS

    /

    15

    10.1±2.8

    CTX

    20

    15

    12.2±4.0

    20.8

    EGCG

    80

    15

    14.0±3.5*

    38.8

    EGCG

    40

    15

    12.2±3.5

    20.8

    EGCG

    20

    15

    11.8±3.6

    16.8

    2

    NS

    /

    15

    9.7±2.5

    CTX

    20

    15

    11.9±3.7

    22.7

    EGCG

    80

    15

    13.5±4.1*

    39.2

    EGCG

    40

    15

    12.3±3.8

    26.8

    EGCG

    20

    15

    11.6±2.7

    19.5

    与阴性对照组比较,*P<0.05表3 EGCG对小鼠移植性肿瘤细胞体外存活的影响 组别

    药物浓度

    (ρB/mgL-1)

    瘤细胞数

    (个/ml)

    S-180

    Hep

    蓝染率

    (%)

    抑瘤率

    (%)

    蓝染率

    (%)

    抑瘤率

    (%)

    对照

    0

    3×107

    8.3

    5.7

    EGCG

    160

    3×107

    76.8**

    68.5

    89.2**

    83.5

    EGCG

    80

    3×107

    68.2**

    59.9

    85.3**

    79.6

    EGCG

    40

    3×107

    62.5**

    54.2

    67.4**

    61.7

    EGCG

    20

    3×107

    52.4**

    44.1

    58.6**

    52.3

    EGCG

    10

    3×107

    28.6**

    20.3

    36.2**

    30.5

    与对照组比,**P<0.01表4 EGCG对小鼠S-180和Hep瘤苗活性的影响 实验

    次数

    组别

    药物浓度

    (ρB/mgL-1)

    瘤细胞数

    (个/ml)

    接种量

    (个/0.1 ml)

    动物数

    (n)

    S-180

    Hep

    接种后

    发病数

    灭 能

    情况

    接种后

    发病数

    灭能

    情况

    1

    对照

    0

    3×107

    3×106

    10

    10

    未灭

    10

    未灭

    EGCG

    160

    3×107

    3×106

    10

    1

    部分灭

    0

    完全灭

    EGCG

    80

    3×107

    3×106

    10

    2

    部分灭

    1

    部分灭

    EGCG

    40

    3×107

    3×106

    10

    5

    部分灭

    3

    部分灭

    EGCG

    20

    3×107

    3×106

    10

    6

    部分灭

    5

    部分灭

    EGCG

    10

    3×107

    3×106

    10

    10

    未灭

    7

    部分灭

    2

    对照

    0

    3×107

    3×106

    10

    10

    未 灭

    10

    未灭

    EGCG

    160

    3×107

    3×106

    10

    1

    部分灭

    0

    完全灭

    EGCG

    80

    3×107

    3×106

    10

    3

    部分灭

    0

    部分灭

    EGCG

    40

    3×107

    3×106

    10

    4

    部分灭

    2

    部分灭

    EGCG

    20

    3×107

    3×106

    10

    8

    部分灭

    6

    部分灭

    EGCG

    10

    3×107

    3×106

    10

    10

    未灭

    9

    部分灭

    表5 EGCG对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响(±s) 组别

    药物剂量

    (mg/kg)

    动物数

    (n)

    体质量

    (m/g)

    相对重量(mg/g体质量)

    胸腺

    脾脏

    NS

    /

    10

    21.1±0.8

    4.47±0.97

    9.86±1.61

    CTX

    20

    10

    19.2±0.8

    2.87±0.71**

    7.65 ±1.52**

    EGCG

    80

    10

    20.9±0.8

    6.03±0.46**

    11.10 ±1.65

    EGCG

    40

    10

    20.7±0.8

    5.30±0.62*

    9.42±1.52

    EGCG

    20

    10

    20.9±0.9

    5.11±0.23

    9.74±1.02

    与对照组比,*P<0.05,**P<0.01

    3 讨 论

    有报道,绿茶及其多酚化合物能阻断亚硝胺类和黄曲霉毒素B1等多种致癌物的化学致 癌 作用[3,4],其主要成分儿茶素能抑制促癌剂引起的癌症正相关基因如C-fos,c -myc的基因表达[10]。绿茶多酚不仅可防癌,也有抗癌作用。茶多酚可抑制鼠MO4 细胞的侵袭性[12],还可抑制小鼠荷瘤(S-180和EAC)的体内生长[5]以及 对多种动物及人肿瘤细胞的体外生长及存活起抑制作用[10,13] 。最近又有报道 ,绿茶水提物可诱导大肠癌LOVO细胞凋亡[7],茶多酚则可诱导人胃癌细胞(MGC-8 03)凋亡[14]。由此可见,茶叶中的茶多酚是其抗肿瘤的主要活性成分,但茶多酚 是含有30多种化学成分的复合物,这些物质在参与抗肿瘤过程中所起的作用仍研究甚少。有 鉴于此,本研究进一步对抗氧化作用强的茶多酚单体成分之一的EGCG的抗肿瘤作用及其量效 关系进行了探讨。

    研究表明,EGCG可抑制小鼠荷瘤生长,并有一定延长荷瘤小鼠生命的作用。在体外亦可 抑制小鼠荷瘤细胞的存活率和明显降低其瘤苗活性。这与上述文献报道的茶多酚的抗肿瘤作 用是一致的。

    有资料说明,癌的各个发展阶段以及癌的治疗等多个方面都与自由基反应密切相关,尤 其与活性氧联系密切[15]。EGCG在表儿茶素类化合物中,具有很强的抗氧化能力, 能清除体内多种自由基形成系统产生的自由基和活性氧[1]。故推测其抗肿瘤作用 可能与其抗氧化性质有关,但其确切的作用机制有待进一步探索。

    许多抗肿瘤化疗药物如CTX,在发挥抗肿瘤作用的同时,也抑制机体的免疫机能,使免 疫器官衰退。茶多酚与此不同,它可增加荷瘤小鼠免疫器官重量,提高机体免疫功能[ 6],因此还有扶正作用。本研究所用EGCG亦有相似作用,其对免疫功能的具体作用正待 研究。了解EGCG的抗肿瘤作用无疑对儿茶素的开发和利用有重要意义。

    广西区科技厅科学研究与技术开发课题 (桂科攻9817091)

    参 考 文 献

    1,梁 钢,黄志明,洪息君.儿茶素3种成分的抗氧化作用研究.广西医科大学学 报,1998,15(1):17.

    2,梁 钢,黄志明,洪息君.茶多酚抗衰老的动物实验研究.广西医学院学报,19 93,10(2):139.

    3,徐国平,宋圃菊.茶叶阻断胃癌高发区人体内源性亚硝基脯氨酸合成.北京医科 大学学报,1991,23(2):51.

    4,赵丽军,印 ,徐冠雄,等.酚类化合物抑制大鼠肝癌启动机理的研究.卫生 毒理学杂志,1995,9(1):1.

    5,童 彤,程书钧,李秀琴,等.没食子酰表没食子对促癌物TPA抑制作用的研究 .癌变.畸变.突变,1992,4(1):1.

    6,曹明富,林植华,虞研原,等.茶多酚对细胞免疫功能的影响及抑瘤作用.现代 应用药学,1994,11(4):4.

    7,谭晓化,张亚历,周殿元,等.绿茶水提取物诱导体外培养的大肠癌LOVO细胞的 凋亡.癌症,1998,17(3):171.

    8,李仪奎主编,中药药理学实验方法.上海:上海科学技术出版社,1991.512.[ ZK)

    9,遵义医学院肿瘤研究组病理生理小组.肿节风抗癌作用的初步实验研究-Ⅰ(肿 节风对L615细胞的直接破坏作用).遵义医学院学报,1978,(1):30.

    10,侯 敢,黄迪南,祝其锋.3种天然抗氧化剂对早幼粒白血病细胞(HL-60)的生 长抑制作用研究.湖南中医学院学报,1996,16(1):49.

    11,胡贵舟,韩 驰,陈君石.茶对促癌物(TPA)诱发小鼠皮肤癌基因表达的影响. 卫生研究,1995,24(4):273.

    12,Bracke ME,Castronovo V,Van Cauwenberge RM,et al.The antiinvasiveflav onoid (+) catechin binds to laminin and abrogates the feect of laminin on cell m orphology and adhesion.Exp Cell Res,1987,173:193.

    13,范贤骏,王云霞,冯素瑜.绿茶儿茶素对体外培养细胞生长的影响.中华肿瘤 杂志,1992,14(3):190.

    14,赵 燕,曹 进.茶多酚诱导人胃癌细胞凋亡.湖南医科大学学报,1997,22( 5):384.

    15,郑荣梁.自由基与癌.见:方允中,李文杰主编.自由基与酶.北京:科学出版 社,1989.270.

    收稿日期:1999-02-08
    婵犵數濮烽弫鎼佸磿閹寸姴绶ら柦妯侯棦濞差亝鍋愰悹鍥皺椤︻厼鈹戦悩缁樻锭婵炲眰鍊濋、姘舵焼瀹ュ棛鍘卞┑鐐村灥瀹曨剟寮搁妶鍡愪簻闁冲搫鍟崢鎾煛鐏炲墽鈽夐柍钘夘樀瀹曪繝鎮欏顔介獎闂備礁鎼ˇ顐﹀疾濠婂吘娑㈠礃椤旇壈鎽曞┑鐐村灦鑿ら柡瀣叄閻擃偊宕堕妸锕€鐨戦梺绋款儐閹歌崵绮嬮幒鏂哄亾閿濆簼绨介柛鏃撶畱椤啴濡堕崱妤€娼戦梺绋款儐閹瑰洭寮诲☉銏″亹鐎规洖娲㈤埀顒佸笚娣囧﹪宕f径濠傤潓闂佸疇顫夐崹鍨暦閸洖鐓橀柣鎰靛墰娴滄瑩姊虹拠鏌ヮ€楃紒鐘茬Ч瀹曟洟宕¢悙宥嗙☉閳藉濮€閻橀潧濮︽俊鐐€栫敮鎺椝囬鐐村€堕柨鏃傜摂濞堜粙鏌i幇顒佲枙闁稿孩姊归〃銉╂倷閸欏鏋犲銈冨灪濡啫鐣烽妸鈺婃晣闁绘劙娼ч幖绋库攽閻樺灚鏆╅柛瀣█楠炴捇顢旈崱妤冪瓘闂佽鍨奸悘鎰洪鍕吅闂佺粯锚閸氣偓缂佹顦靛娲箰鎼达絿鐣甸梺鐟板槻椤戝鐣烽悽绋块唶婵犮埄浜濆Λ鍐极閸屾粎椹抽悗锝庝簻婵″ジ姊绘担鍛婃喐闁稿鍋ら獮鎰板箮閽樺鎽曢梺鍝勬储閸ㄥ綊鐛姀銈嗙厸闁搞儮鏅涘瓭婵犵鈧尙鐭欓柡宀嬬秮婵偓闁宠桨鑳舵禒鈺冪磽閸屾氨孝闁挎洦浜悰顔界節閸ャ劍娅㈤梺缁樓圭亸娆撴偪閳ь剚淇婇悙顏勨偓鏍箰妤e啫纾婚柣鏂挎憸椤╃兘鏌熼幍顔碱暭闁抽攱鍨块弻娑㈡晜鐠囨彃绗岄梺鑽ゅ枑閸f潙煤椤忓嫀褔鏌涢妷顔惧帥婵炶偐鍠栧娲礃閸欏鍎撻梺鐟板暱濮橈妇鎹㈠鑸碘拻濞达絽鎳欒ぐ鎺戝珘妞ゆ帒鍊婚惌娆撴煙閻戞﹩娈曢柛濠傜仛閵囧嫰寮崹顔规寖缂佺偓鍎抽妶鎼佸蓟閿熺姴绀冮柕濞垮劗閸嬫挾绮欓幐搴㈢槑濠电姷鏁告慨顓㈠箯閸愵喖绀嬮柛顭戝亞閺夊綊鏌f惔銏╁晱闁哥姵鐗犻幃銉╂偂鎼达絾娈惧┑顔姐仜閸嬫挸鈹戦埄鍐憙妞わ附濞婇弻娑㈠箻閺夋垹浠哥紓浣虹帛缁嬫捇鍩€椤掍胶鈯曞畝锝呮健閹本绻濋崑鑺ユ閹晠宕f径瀣瀾闂備浇妗ㄧ欢锟犲闯閿濆鈧線寮撮姀鈩冩珕闂佽姤锚椤︿粙鍩€椤掍胶鈽夐柍瑙勫灴閺佸秹宕熼锛勬崟濠电姭鎷冮崨顔界彧缂備緡鍠楅悷锔炬崲濠靛鐐婇柕濞у啫绠版繝鐢靛О閸ㄧ厧鈻斿☉銏℃櫇闁靛牆顦Ч鏌ユ煛閸モ晛鏋戦柛娆忕箻閺岋綁鎮㈤悡搴濆枈濠碘槅鍨崑鎾绘⒒娴h姤銆冪紒鈧担铏圭煋闁圭虎鍠楅崑鈺傜節闂堟侗鍎忕紒鈧崘鈹夸簻妞ゆ挾鍠庨悘锝夋煙鐎电ǹ鍘存慨濠勭帛閹峰懐绮电€n亝鐣伴梻浣告憸婵敻骞戦崶褏鏆︽繝闈涳功閻も偓濠电偞鍨兼ご鎼佸疾閿濆洨纾介柛灞剧懅閸斿秴鐣濋敐鍛仴闁糕斂鍨藉顕€宕奸悢鍝勫箺闂備胶鎳撻顓㈠磿閹寸偟鐟规繛鎴欏灪閻撴洟鏌¢崒姘变虎闁哄棴缍侀弻鈥崇暆鐎n剛鐦堥悗瑙勬礃鐢帡锝炲┑瀣垫晣闁绘﹢娼ч獮鈧紓鍌氬€搁崐鐑芥倿閿曞倶鈧啴宕ㄥ銈呮喘閺屽棗顓奸崨顖氬Е婵$偑鍊栫敮鎺楀窗濮橆兗缂氶柟閭﹀枤绾惧吋銇勯弮鍥т汗缂佺姴顭烽弻銊モ攽閸繀妲愰梺杞扮閸熸潙鐣烽幒鎴僵闁告鍋為幉銏ゆ⒒娴h棄鍚瑰┑鐐╁亾缂傚倸鍊归懝楣冨煝瀹ュ鏅查柛銉㈡櫇閻撳姊洪崜鑼帥闁哥姵鎹囬崺鈧い鎺嶇缁楁帗銇勯锝囩疄妞ゃ垺锕㈤幃鈺咁敃閿濆孩缍岄梻鍌氬€风欢姘缚瑜嶇叅闁靛牆鎮垮ú顏勎╅柍杞拌兌閸旓箑顪冮妶鍡楃瑨闁稿妫濆銊╂偋閸垻顔曟繝銏f硾椤戝洤煤鐎电硶鍋撶憴鍕8闁搞劏濮ゆ穱濠囧醇閺囩偟鍊為梺闈浨归崕鐑樺閺囥垺鐓熼柣鏂挎憸閻苯顭胯椤ㄥ牓寮鍢夋棃宕崘顏嗏棨濠电姰鍨奸崺鏍礉閺嶎厼纾婚柨婵嗩槹閻撴洟鏌曟径妯虹仩妞も晩鍓欓埥澶愬箻閻熸壆姣㈢紓浣介哺鐢岣胯箛娑樜╃憸蹇涙偩婵傚憡鈷戠憸鐗堝俯濡垵鈹戦悙鈺佷壕闂備浇顕栭崰妤冨垝閹捐绠板┑鐘插暙缁剁偛顭跨捄铏圭伇婵﹦鍋撶换婵嬫偨闂堟稐绮跺銈嗘处閸樹粙骞堥妸锔哄亝闁告劑鍔嶅Σ顒勬⒑閸濆嫮鈻夐柛妯恒偢瀹曞綊宕掗悙瀵稿帾婵犵數鍋熼崑鎾斥枍閸℃稒鐓曢悗锝冨妼婵″ジ妫佹径鎰叆婵犻潧妫欓崳褰掓煛閸℃瑥鏋戝ǎ鍥э躬椤㈡稑顫濋崡鐐╁徍婵犳鍠栭敃銉ヮ渻娴犲鈧線寮撮姀鈩冩珳闂佺硶鍓濋悷锕傤敇婵犳碍鈷掑ù锝堟鐢盯鏌熺喊鍗炰簽闁瑰箍鍨归埞鎴犫偓锝庡墮缁侊箓鏌f惔顖滅У闁哥姵鐗滅划濠氭晲閸℃瑧鐦堟繝鐢靛Т閸婃悂顢旈锔界厵闁哄鍋勬慨鍌涙叏婵犲啯銇濇鐐村姈閹棃鏁愰崒娑辨綌闂傚倷绀侀幖顐︽偋濠婂牆绀堥柣鏃堫棑閺嗭箓鏌i悢绋款棎闁割偒浜弻娑㈠即閵娿儱瀛e┑鐐存綑鐎氼剟鈥旈崘顔嘉ч柛鈩冾殘閻熸劙姊虹紒妯洪嚋缂佺姵鎸搁锝夊箮缁涘鏅滈梺鍓插亞閸犳捇宕㈤柆宥嗏拺闁荤喓澧楅幆鍫㈢磼婢跺缍戦柣锝囨暬瀹曞崬鈽夊▎鎴濆笚闁荤喐绮嶇划鎾崇暦濠婂喚娼╂い鎺戭槹閸嶇敻姊洪棃娴ュ牓寮插⿰鍫濈;闁稿瞼鍋為悡銉╂煟閺傛寧鎯堢€涙繈鏌i悢鍝ユ嚂缂佺姵鎹囬悰顕€寮介鐐殿啇濡炪倖鎸鹃崑鐔哥椤栨粎纾藉ù锝嗗絻娴滅偓绻濋姀锝嗙【闁愁垱娲濋妵鎰板箳閹寸媭妲梻浣呵圭换妤呭磻閹邦兘鏋旈柕鍫濐槹閳锋垹绱撴担璐細缂佺姵鐗犻弻锝夊煛婵犲倻浠╅梺浼欑悼閸忔﹢寮幘缁樺亹闁肩⒈鍓﹀Σ浼存⒒娴h棄浜归柍宄扮墦瀹曟粌顫濇0婵囨櫓闂佺鎻梽鍕煕閹达附鍋i柛銉岛閸嬫捇鎼归銈勭按闂傚倷绀侀幉锟犲蓟閵婏富娈介柟闂寸閻撴繈鏌熼幑鎰靛殭缂佺媴缍侀弻锝夊箛椤撶喓绋囧銈呭閹告悂鍩為幋锔藉亹閻犲泧鍐х矗闂備礁鎽滈崳銉╁垂閸洜宓侀柛鈩冪☉绾惧吋鎱ㄩ敐搴″箹缂傚秴锕獮鍐煛閸涱厾顔岄梺鍦劋缁诲倹淇婇柨瀣瘈闁汇垽娼цⅴ闂佺ǹ顑嗛幑鍥蓟閻斿皝鏋旈柛顭戝枟閻忔挾绱掓ィ鍐暫缂佺姵鐗犲濠氭偄鐞涒€充壕闁汇垻娅ラ悷鐗堟瘎闂佽崵鍠愮划搴㈡櫠濡ゅ懏鍋傞柨鐔哄Т閽冪喐绻涢幋娆忕仼缂佺姵濞婇弻锟犲磼濮樿鲸鐨戦梺鍝勵儏閹冲酣鍩為幋锔藉€烽柛娆忣槸濞咃綁姊绘担绋跨盎缂佽尙鍋撶粚杈ㄧ節閸パ咁啋濡炪倖妫佹慨銈呪枍閵忋倖鈷戦悹鎭掑妼濞呮劙鏌熼崙銈嗗

   闂傚倷娴囬褍霉閻戣棄鏋佸┑鐘宠壘绾捐鈹戦悩鍙夋悙缂佹劖顨婇弻锟犲炊閳轰焦鐏侀梺宕囨嚀缁夋挳鍩為幋锔藉亹闁告瑥顦伴幃娆忊攽閳藉棗浜濋柨鏇樺灲瀵鈽夐姀鐘栥劑鏌曡箛濠傚⒉闁绘繃鐗犻幃宄扳堪閸愩劎鐩庨梺鐟板殩閹凤拷  闂傚倸鍊搁崐鐑芥嚄閼哥數浠氱紓鍌欒兌缁垶銆冮崨鏉戠厺鐎广儱顦崡鎶芥煏韫囨洖校闁诲寒鍓熷铏圭磼濡搫顫庨梺绋跨昂閸婃繂鐣烽弴鐐垫殕闁告洦鍓涢崢浠嬫⒑闁稑宓嗘繛浣冲嫭娅犳い鏂款潟娴滄粓骞栭幖顓炵仭閻庢熬鎷�  闂傚倸鍊峰ù鍥х暦閸偅鍙忛柡澶嬪殮濞差亜围闁搞儻绲芥禍鐐叏濡厧甯堕柣蹇ラ檮閵囧嫰濮€閿涘嫭鍣板Δ鐘靛仜椤戝寮崘顔肩劦妞ゆ帒鍊婚惌鍡涙煕閺囥劌鐏¢柣鎾跺枑娣囧﹪顢涘┑鎰缂備浇灏畷鐢垫閹炬剚鍚嬮煫鍥ㄦ煥椤忥拷  闂傚倸鍊搁崐鐑芥嚄閸洖绠犻柟鎹愵嚙鐟欙箓鎮楅敐搴″闁搞劍绻堥獮鏍庨鈧俊鑲╃棯閹佸仮闁哄本娲樼换娑㈡倷椤掍胶褰呴梻浣告啞椤ㄥ棙绻涙繝鍥ц摕闁斥晛鍟欢鐐烘倵閿濆簼绨介柛鏃偳归埞鎴﹀煡閸℃浼堥梺鐟板殩閹凤拷