睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
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青岛市环保局崂山分局 青岛266101；北京大学第一医院检验科 北京100034 张国华；徐国宾；刘英民；夏铁安
睾酮假单胞菌|3α羟类固醇脱氢酶|重组质粒|基因表达|胆汁酸|
参见附件(67kb)。
青岛市环保局崂山分局 青岛266101；北京大学第一医院检验科 北京100034 张国华；徐国宾；刘英民；夏铁安
关键词：睾酮假单胞菌；3α羟类固醇脱氢酶；重组质粒；基因表达；胆汁酸；
摘要：从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析 ,经一步金...
青岛市环保局崂山分局 青岛266101；北京大学第一医院检验科 北京100034 张国华；徐国宾；刘英民；夏铁安
关键词：睾酮假单胞菌；3α羟类固醇脱氢酶；重组质粒；基因表达；胆汁酸；
摘要：从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析 ,经一步金...
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