陈婷婷 郑丰平 谭嗣伟 陶金 吴斌

    溃疡性结肠炎 (UC) 是一种以直肠、结肠黏膜及黏膜下层慢性非特异炎症为特征的肠道疾病。目前，对UC的发病机制研究很多，但仍未阐明。当前的研究表明UC的发病与环境、遗传、免疫等多个因素有关，特别是与免疫因子异常关系密切[1]。作为一种多效能生长因子, 转化生长因子-β (TGF-β) 在肠道免疫平衡中发挥着不可替代的作用，其可通过下调过度的免疫应答反应从而抑制炎症的发生与发展[2]。Smads家族成员是TGF-β下游的信号蛋白分子, Smad3是其关键始动因子。故本研究建立了小鼠UC模型，试图探索结肠黏膜损伤与修复过程以及Smad3在TGF-β信号通路中的作用。

    材料与方法

    一、实验动物

    无特定病原体(SPF)级C57BL/6小鼠60只，雄性，周龄8周，体质量20～25 g，购自中山大学北校区动物实验中心。

    二、主要试剂

    葡聚糖硫酸钠 (MP Biomedicals)、苏木素-伊红染料 (中杉金桥)、TUNEL试剂盒(Roche)、p-Smad3和Smad3抗体 (Cell Signaling Technology)、cleaved caspase-3抗体 (Cell Signaling Technology)、TGF-β抗体 (Abcam)、β-actin抗体 (Sigma)、Ki67抗体及PCNA抗体 (Santa Cruz)、DAB显色液(DAKO)。

    三、实验方法

    1.UC小鼠模型建立

    小鼠随机分为6组，每组10只。小鼠自由饮用3%DSS 5 d建立急性UC模型，后改为饮用正常蒸馏水修复。分别在3%DSS 5 d，饮水修复1、2、3、4周时处理小鼠。

    2.小鼠疾病活动指数评估

    每日观察记录小鼠的状态、饮食、活动、体质量、大便以及死亡情况。称量体质量，观察粪便性状及粪便隐血情况进行疾病活动指数评分：体质量正常积分为0，体质量减轻1%～5%为1，减轻5%～10%为2，减轻10%～20%为3，减轻大于20%积分为4；大便成形积分为0，糊状/半成形为1，稀便为4；大便潜血阴性积分为0，大便潜血阳性为2，肉眼血便为4。将三者总分相加，得出每只小鼠的疾病活动指数[3]。

    3.标本采集与处理

    10%水合氯醛麻醉后行开腹手术，迅速剖取结肠，沿肠系膜剪开，预冷生理盐水漂洗后，观察炎症及溃疡情况。结肠组织放入10%福尔马林中固定制作成石蜡标本或于冰上刮取结肠黏膜 ......