解杰 李丽珍 黄涛 王鲁群 李颢 李湘新 王玲玲 李芳邻

    骨髓增生异常综合征(MDS)是一组起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，其预后呈现明显异质性。根据1997年Greenberg提出的国际预后评分系统(IPSS)可将MDS分为低危组、中危-1组、中危-2组和高危组。低危组患者多表现为难治性贫血、白细胞和血小板减少，但原始病态造血的程度较轻，因而多数患者生存时间较长。近来研究证实，低危MDS患者骨髓微环境中一些应激性刺激可引起造血干/祖细胞过度凋亡从而导致骨髓无效造血和外周血细胞数减少[1]。细胞的高凋亡贯穿于疾病的各个阶段，以难治性贫血(MDS-RA)及环形铁粒幼细胞性难治性贫血(MDS-RAS)为著。目前，低危MDS的治疗主要是对症支持、低甲基化治疗等，但疗效不理想。血红素加氧酶-1(HO-1)参与清除细胞内氧自由基，减少细胞应激性凋亡，这种作用可能与MAPK 信号通路有关[2-3]。本研究通过检测在不同浓度HO-1诱导剂Hemin干预下，低危MDS患者HO-1的表达水平的变化及HO-1基础水平的变化与患者预后的关系，探讨HO-1可能的作用机制和临床靶向治疗的可能。

    对象与方法

    一、研究对象

    采集2008年9月至2012年9月在山东大学齐鲁医院血液科就诊的60例初治低危MDS患者骨髓，其中男28例、女32例，年龄19～80岁、中位年龄55岁，病程0.5～8.3年、中位病程5.6年。病理分型包括：MDS-RA 45例、MDS-RAS 15例，MDS的诊断符合2008年WHO分型标准[4]。另外，采集同期在我院就诊的缺铁性贫血(IDA)患者20例的骨髓作为对照，男9例、女11例，年龄20～78岁、中位年龄50岁。所有标本取材均获得山东大学齐鲁医院伦理委员会批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

    二、方 法

    用蛋白免疫印迹法检测60例初诊低危MDS患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)中HO-1蛋白表达水平及JNK信号分子磷酸化水平的表达，并追踪随访MDS患者无进展生存期(PFS)。

    1.主要材料

    胎牛血清和RPMI 1640培养液(Gibco公司)，Hemin(Sigma公司)，RIPA细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所)，c-Jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化JNK(p-JNK)、β-actin等一抗及二抗(Cell signaling technology公司)，HO-1一抗(Abcam公司)。

    2.BMMNCs的提取与体外孵育 ......