田宇 胡玉芝 鲁衍强 马少杰 杨琦

    叶酸为水溶性B族维生素，在体内主要参与一碳单位的转运，是核酸合成的必要元素，也是细胞生长和组织修复必需物质。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)是叶酸转运和代谢的关键酶。MTHFR基因C677T位点、A1298C位点与MTRR基因A66G位点的多态性会影响MTHFR与MTRR的酶活性降低，造成叶酸代谢异常，阻碍同型半胱氨酸转化成甲硫氨酸，引起高同型半胱氨酸血症，临床上会增加孕妇生产神经管畸形胎儿、唇腭裂胎儿、唐氏综合征胎儿与先天性心脏病胎儿的风险[1-5]。为此，本研究对无锡市育龄妇女叶酸代谢基因MTHFR和MTRR相关位点多态性分布进行分析，了解无锡地区妇女叶酸代谢相关基因的分布特点与群体遗传学特征，为本地区预防出生缺陷制定针对性的干预措施提供科学依据。

    对象与方法

    一、研究对象

    选取无锡市2009年3月至2012年6月在无锡虹桥医院进行孕前与孕期检查的无亲缘关系女性，根据知情同意原则，经受检者本人同意后，采集其口腔黏膜细胞进行后续研究。对所有口腔黏膜细胞进行基因组DNA抽提，排除抽提不符合要求者，共获得有效样本524例，其中，汉族521例，少数民族3例。样本提供者年龄(27.0±4.8)岁。

    二、方 法

    采集受检者的口腔黏膜上皮细胞，利用硅胶吸附方法抽提样本的基因组DNA。采用荧光定量PCR技术，分别检测分析叶酸代谢相关的3个DNA单核苷酸多态性位点(MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G)。每个反应体系总体积10 μl，包含20 ng/μl的模板DNA 1 μl， Taqman通用混合物5 μl， Taqman-MGB探针0.5 μl，去离子水3.5 μl。其中，MTHFR C667T、A1298C与MTHRR A66G具体探针信息见表1，相关仪器、试剂均购自美国ABI公司。反应条件为95℃预热10 min，其后，扩增20个循环，每个循环92℃变性15 s ......