李天晓 元刚 叶丽君 孙健 黎曙霞

    胃癌是世界范围难治性肿瘤之一。诱导肿瘤细胞凋亡是研发抗癌药的目标之一，棉酚衍生物ApoG2是针对细胞凋亡调节因子Bcl2蛋白家族中抗凋亡蛋白结构开发出的新型棉酚衍生物，能够拮抗Bcl2抗凋亡作用，释放促凋亡蛋白Bax和Bak，启动细胞凋亡程序[1]。目前ApoG2抗肿瘤能力已被广泛证明，ApoG2不仅能影响Bcl2家族的表达激活线粒体凋亡通路，也能通过诱导内质网应激凋亡、细胞自噬等其他途径引起肿瘤细胞死亡，提示ApoG2可能激活多条抑癌通路[2-4]。近来发现WNT信号通路在消化道系统肿瘤发生过程中扮演了重要角色。胃上皮组织Wnt/β-catenin通路的激活可直接引起肿瘤的形成[5]。Wnt6是WNT家族重要成员，参与调控细胞活动，包括细胞增殖、分化和迁移，在肿瘤细胞中高度表达，并且介导了胃癌细胞对化学治疗的抵抗性[6-7]。WNT与Bcl2信号通路存在广泛的相互作用[8-9]。有研究发现ApoG2能显著下调WNT信号靶基因c-Myc和细胞周期蛋白cyclin D1的表达，但ApoG2对WNT蛋白家族的影响尚未见报道[10]。本研究以人胃腺癌细胞株BGC823为模型研究ApoG2诱导胃癌细胞凋亡的作用，并检测ApoG2对Bcl2家族及Wnt6表达的影响，进一步探讨ApoG2抗肿瘤机制和应用前景，现报告如下。

    材料与方法

    一、细胞与试剂

    人胃癌细胞株BGC823由中山大学附属第一医院消化内科实验室馈赠，培养于完全培养基[含10%胎牛血清(Gibco，美国)、100 kU/L青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基(Gibco，美国)]，培养环境37℃，5% CO2。ApoG2由上海亚盛医药科技有限公司杨大俊教授馈赠，溶解于二甲亚砜(MP Biomedicals，美国)配成20 mmol/L储存液，-20℃保存。

    二、方 法

    1.ApoG2对胃癌细胞BGC823生长抑制作用的检测

    采用噻唑蓝(MTT)法。消化对数生长期的胃癌细胞BGC823，以培养液稀释成终浓度为1×105/ml的单细胞悬液，每孔100μl接种于96孔培养板中，待细胞贴壁后弃去培养液，用不含血清的培养基梯度稀释ApoG2母液至不同浓度(终浓度为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125μmol/L)，加入培养孔中，每个浓度设3个复孔，对照组和调零组加入含0.1% 二甲亚砜培养基，其中调零组不接种细胞。分别培养24、48、72 h后 ......