廖坚松 陈焕忠 茹晃耀 柯尊富

    我国结直肠癌的发病率持续上升，病死率较高。到目前为止，结直肠癌的发病机制尚未完全清楚，其治疗效果仍不够理想，肿瘤的复发和转移是治疗难点。既往的研究表明，结直肠癌的生长、转移和复发均依赖于肿瘤新生血管的生成，故抑制肿瘤新生血管的生成可能成为结直肠癌治疗的新方向[1]。内皮细胞生长因子(VEGF)是一种促肿瘤新血管生成的生长因子，其表达水平与肿瘤的恶性程度、转移和微血管密度等呈正相关[2]。热休克蛋白90(HsP90)抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)是格尔德霉素的新一代衍生物，与上一代相比，17-DMAG的水溶性和生物利用度明显提高[3]。笔者见有关17-DMAG抗肿瘤活性的研究较少，故观察了17-DMAG对结直肠癌VEGF的表达和肿瘤微血管生长的影响，以探讨其可能的抗肿瘤作用机制。

    材料与方法

    一、材 料

    BALB/C-nu/nu裸鼠(SPF级)购于中山大学附属第一医院动物实验中心，共24只，4～6周龄，体质量24～28 g，分笼饲养(每笼4只)。人结肠癌SW620细胞株由中山大学附属第一医院动物实验中心提供并保存。17-DMAG购于北京启维益成科技公司，溶解后配成2 g/L的储存液，保存于-4℃冰箱。VEGF购于北京博奥森生物技术有限公司。血小板内皮细胞黏附分子(CD31)购于深圳华拓生物有限公司。

    二、动物模型的制备

    将人结肠癌SW620细胞株复苏、传代后进行常规收集，调整细胞终密度为5×107个/ml。于裸鼠左侧肋腹部皮下接种，注射剂量为每只200μl，含细胞1×107个。术后精心饲养，每日观察1～2次。一般于接种后4 d出现肉眼可见的肿瘤，隔日用游标卡尺测量肿瘤的大小，计算肿瘤体积：体积=0.52×长径×短径2。

    三、实验动物分组及取材

    待裸鼠皮下肿瘤生长到体积约100 mm3时，随机把裸鼠分为3组，每组8只：①17-DMAG组腹腔注射17-DMAG 25 mg/kg；②5-氟尿嘧啶(5-FU)组腹腔注射5-FU 20 mg/kg(最常用的结直肠癌化学治疗药)；③对照组腹腔注射生理盐水10 ml/kg。3组均每周给药3次，共4周。4周后采用颈椎脱臼法处死小鼠，剥取瘤组织，测量瘤体质量和体积 ......