朱斌 陈芳 侯常 黎丽红 黄素华

    羊水对于胎儿的正常发育至关重要，其生成量和成分与胎儿的发育、胎盘和羊膜腔的功能密切相关[1]。羊水中蛋白质组学研究亦成为近年研究热点。本研究初步观察了在羊水中特异表达的蛋白质及高表达的蛋白质，旨在为妊娠相关疾病的发生、发病机制的探索研究提供理论依据，现报告如下。

    材料与方法

    一、试剂及仪器

    1.试 剂

    主要有：ProteoPrep Blue Albumin and IgG Depletion Kit血清高丰度蛋白去除试剂盒、四甲乙二胺(Sigma，美国)，固相化pH 4～7、24 cm梯度干胶条、Bradford染液(Bio-Rad，美国)，丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、Tris、甘氨酸十二烷基磺酸钠(SDS)、尿素、CHAPs、过硫酸铵、碘乙酰氨、二硫苏糖醇(Amersham Pharmacia Biotech，瑞典)，一氯乙腈(成都贝斯特)。

    2.仪 器

    包括：IPGphor3等电聚焦仪、EttanDALT垂直电泳槽、Image scanner扫描仪、超声仪(GE，美国)，Autoflex speed？MALDI-TOF质谱仪(Bruker Dalton，美国)，冷冻离心机(中国科学院武汉科学仪器厂)等。

    二、蛋白样品的制备

    选择3名正常妊娠晚期(37周)孕妇，征得其知情同意后，以羊膜穿刺法采集3份羊水标本，每份5 ml，同时以肘部穿刺取静脉血标本3份，每份5 ml。所采集的标本分别在4℃、16 000×g离心15 min，取上清，0.4μm过滤后分装， -70℃保存。离心超滤浓缩样品，ProteoPrep Blue Albumin and IgG Depletion Kit试剂盒去除血清高丰度蛋白质，加入4倍体积丙酮，-20℃沉淀过夜。沉淀所得到的蛋白于4℃、12 000×g离心20 min，弃上清，晾干，-80℃冻存备用。用Bradford法定量蛋白质浓度 ......