覃杰 闫翠 陈极锋 单鸿

    干细胞治疗有望治愈心肌梗死和预防慢性心力衰竭，但伦理、干细胞来源有限及异体干细胞免疫排斥等问题尚未解决，阻碍了干细胞在临床的进一步应用[1-3]。Yeh 等[3]报道脂肪干细胞(ADSC)可向多种细胞分化，并能分泌多种细胞因子。李博等[4]报道ADSC能有效改善心肌梗死后的心功能。与骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞和脐带血干细胞等相比，ADSC具有来源广泛、容易取材、损伤较小、自体移植无免疫排斥、体外增殖速度快优势[3-4]。使用ADSC移植可克服伦理、干细胞来源有限及异体干细胞免疫排斥等问题，但单纯使用ADSC移植治疗心肌梗死，效果欠佳[2-4]。Zhang等[5]报道碱性成纤维生长因子(bFGF)可促进内皮细胞和平滑肌细胞增殖，增加新生血管，提高局部血流量。Yao等[6]报道bFGF可提高梗死区域血管密度，减少心肌梗死面积。少有文献研究报道bFGF在ADSC治疗心肌梗死的作用。为此，本研究使用ADSC及bFGF移植治疗心肌梗死，探讨bFGF在ADSC治疗心肌梗死中的作用。

    材料与方法

    一、ADSC的分离培养及标记

    取大鼠腹股沟脂肪组织，以磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗碎片及血细胞。在37℃下用0.1 g/L I型胶原酶(Sigma)消化脂肪组织后离心、过滤、重悬，接种至培养皿培养，3 d后换液，弃除未贴壁细胞，每隔3 d换液，贴壁细胞长至90%时，使用胰酶消化传代，并用PKH26标记细胞。

    二、流式细胞分析

    使用 PE标记的抗大鼠 CD29(Biolegend)、FITC标记的 CD90(Biolegend)、FITC标记的CD45(Biolegend)以及PE标记的CD34(Santa Cruz)抗体进行流式细胞分析。4℃恒温避光孵育30 min后，PBS冲洗2次，离心弃上清液。用10 g/L多聚甲醛(PFA)溶液固定，设同型对照，4 h内完成流式细胞仪(FACS)检测。

    三、ADSC的分化潜能鉴定

    成脂诱导:1.0×105细胞/孔的密度接种于6孔培养板，待细胞密度大于90%后，加入含100 ml/L胎牛血清、10-8mol/L地塞米松、5 μg/ml胰岛素的H-DMEM成脂诱导液，于37℃、体积分数为5%CO2恒温培养箱中继续培养，每3 d更换新鲜诱导液。诱导分化20 d后弃成脂诱导液，PBS洗3次，1 g/L中性甲醛室温固定1 h，PBS清洗后加入油红O染色1 h ......