旷文佳 陈美华 董晨

    子痫前期是妊娠期特有的疾病，是导致孕产妇及围生儿患病及死亡的重要原因之一[1]。早期监测该病的发生、发展，有助于及早发现子痫前期的高危孕妇，并及时给予监护和处理，从而降低孕产妇及围生儿病死率，但现今尚缺乏预测子痫前期发生的相对有效且无创的指标[2]。目前，多项研究发现子痫前期孕妇血浆中胎儿游离核酸的水平可在一定程度上预测子痫前期的发生。而超甲基化的Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因是胎儿特有的表观遗传学标志物，可能在预测子痫前期的发生中具有一定的价值，但尚需进一步的临床研究[3-4]。为此，本研究检测了孕中期孕妇血浆中超甲基化RASSF1A基因表达水平，旨在探讨其在预测子痫前期发生中的应用价值，现报告如下。

    对象与方法

    一、研究对象

    选择2012年1月至2013年12月在我院规律产前检查的506例孕妇，分别于孕15～19周及孕20～24周采外周血，同时监测孕妇血压、尿蛋白值，其中诊断为妊娠期高血压疾病96例孕妇，包括子痫前期孕妇48例 (子痫前期组)、妊娠期高血压孕妇48例 (妊娠期高血压组)。入组标准:①单胎;②年龄18～45岁;③符合第7版《妇产科学》子痫前期或妊娠期高血压的诊断标准[5]。选取同期18～45岁的96名单胎健康孕妇为对照组。各组孕妇年龄、产次、孕前BMI比较差异均无统计学意义 (P均>0.05)，见表1。子痫前期组孕妇分娩孕周及新生儿出生体质量均低于妊娠期高血压组及对照组，比较差异均有统计学意义 (P<0.05)，见表1。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

    表1 各组孕妇一般情况比较

    二、方 法

    1.样本采集

    抽取研究对象空腹肘静脉血4 ml放入依地酸二钠抗凝管中，离心分离血浆，置-80°C冰箱冻存备用。

    2.血浆中胎儿游离DNA的提取

    取待检血浆1 ml，采用德国Qiagen公司提供的QIAamp Blood Mini kit试剂盒，按照说明书的操作步骤从血浆中提取游离DNA。

    3.甲基化敏感的限制性内切酶消化

    在0.5 ml的EP管中建立以下体系:模板DNA 25 μl，HinP1 I内切酶 20 U，Hha I内切酶 20 U(美国New England Biolabs公司) ......