周立兵 李新钢

    基础研究论著

    左卡尼汀对老年大鼠脑缺血再灌注损伤HMGB1表达的影响

    周立兵 李新钢

    目的探讨左卡尼汀预处理对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用以及对高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响。方法将45只SD老年大鼠随机分为3组各15只，包括假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、左卡尼汀干预组(LC组)。LC组及IR组通过右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型。LC组于大鼠脑缺血再灌注建模前连续每日注射左卡尼汀200 mg/kg共1周。建模后24 h留取大鼠血浆以及脑组织标本。采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)检测各组大脑皮质区细胞凋亡情况。采用ELISA检测各组血浆HMGB1、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛的表达。采用蛋白免疫印迹法检测各组脑组织HMGB1蛋白的表达。结果与SHAM组凋亡指数(0.4±0.1)%相比，IR组凋亡指数(45.1±4.2)%更高(P材料与方法

    一、实验材料

    浙江大学医学院动物实验室提供的SD老年大鼠，雌性清洁级，共45只，260～360 g，出生12个月以上。TUNEL试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。

    二、动物分组和模型的建立

    实验分组：45只大鼠随机分为3组各15只，包括假手术组(SHAM组)、缺血再灌注组(IR组)、左卡尼汀干预组(LC组),LC组于大鼠脑缺血再灌注建模前连续每日注射左卡尼汀200 mg/kg共1周。

    LC组及IR组通过右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型：于大鼠腹腔内注射10%水合氯醛(0.35 ml/100 g)进行麻醉，切开其颈部,分离右侧颈部动脉，夹闭右颈总动脉及右颈内动脉，在颈外动脉起始端剪开一小切口，插入直径0.236 mm的进口鱼线,以分岔口处开始测量距离,插入1.8～2 cm后固定鱼线,缝合。缺血2 h后将线栓拉出1 cm左右即可形成再灌注。其后分2次缓慢拔出栓线，结扎血管,再灌注12 h。SHAM组插入1.0 cm鱼线，其余步骤同上。IR组夹闭过程中死亡1只，予以剔除。建模后24 h留取血浆以及脑组织标本。

    三、脑梗死体积的测定

    再灌注12 h后，麻醉大鼠、快速断头取其脑组织，将脑组织切片置于2%氯代三苯基四氮唑(TTC)溶液中染色固定 ......