张彩 游泽山 李理 李晓明

    临床研究论著

    胎盘中血管内皮生长因子及其受体1改变与子痫前期的相关性研究

    张彩 游泽山 李理 李晓明

    目的探讨胎盘中血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体1(sFlt-1)的变化与妊娠期高血压疾病的关系。方法采用半定量逆转录PCR法和免疫组织化学染色法检测20例正常人工流产绒毛组织、40例正常妊娠晚期、40例轻度子痫前期及40例重度子痫前期孕妇胎盘组织中VEGF及sFlt-1的表达及胎盘微血管密度(MVD)。结果子痫前期和正常妊娠孕妇绒毛或胎盘中均有VEGF、sFlt-1 mRNA和蛋白的表达。正常妊娠早期组、正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组VEGF、sFlt mRNA及蛋白表达水平两两比较差异均具有统计学意义(P均对象与方法

    一、研究对象

    2010年1月至2011年10月在我院诊断为轻度子痫前期(40例)、重度子痫前期(40例)单胎孕妇和40名与之年龄、孕周相匹配的无妊娠合并症的正常妊娠晚期孕妇。妊娠期高血压疾病的诊断及分类标准参照全国高等学校教材《妇产科学》第7版[3]。同时收集妊娠早期人工流产绒毛组织20例。重度子痫前期孕妇40例，孕(37±3)周；轻度子痫前期孕妇40例，孕(37±5)周。正常妊娠晚期妊娠妇女40例，均为孕37～38周无子宫收缩入院，而行剖宫产术终止妊娠者。所有孕妇均无高血压病及心脏病史，无慢性肾炎等泌尿系统疾病，无贫血及巨大儿和胎儿生长受限的发生。

    二、方法

    1.胎盘标本收集

    待孕妇胎盘娩出后，于母面近脐带处，避开钙化点迅速取胎盘组织2～4块，每块约2 cm×2 cm×2 cm，灭菌生理盐水反复漂洗，去除母体血液后吸掉水分，迅速置于液氮中，过夜后置于-80℃冰箱保存备用。

    2.总RNA的提取

    取保存的胎盘组织150 mg放入预冷的10 mm×15 mm试管中，加入Trizol总RNA抽提试剂1 ml用电动匀浆器冰浴下粉碎组织成匀浆，按照Trizol试剂盒说明书提取总RNA，紫外分光光度计测定吸光度A值，1%琼脂糖凝胶电泳可见28 S、18 S条带，表明RNA质量符合要求，可用于逆转录。

    3.RNA逆转录及目的基因片段的扩增

    将所有总RNA均匀稀释至0.5 g/L，按照美国Promega公司的逆转录试剂盒说明书操作 ......