黄烁丹 占伟 邹婕 庄宇嫦 熊蓉 朱莎莎 张华能 栾国彦

    临床研究论著

    滤纸干血斑DNA自动化提取及其在地中海贫血基因诊断中的应用

    黄烁丹 占伟 邹婕 庄宇嫦 熊蓉 朱莎莎 张华能 栾国彦

    目的研究滤纸干血斑(DBS)DNA 的自动化提取方法及其在地中海贫血(地贫)基因诊断中的应用。方法将276份经静脉血标本基因检测确诊为地贫的孕妇外周血标本按照研究需要分别制成240份合格、18份渗透不良和18份重复滴血滤纸干血斑标本，并模拟不同的运输和储存条件。使用 Lab-Aid 820 核酸提取仪对滤纸干血斑进行DNA提取，考察不同的起始血斑用量检测的准确度，对提取的DNA进行浓度和纯度分析，并分别使用荧光PCR熔解曲线法和PCR联合膜杂交法对DNA进行地贫基因检测。结果276份滤纸干血斑标本提取的DNA浓度9.85～29.56 ng/μl，纯度1.63～1.95，均能满足试剂盒检测要求，其中2种基因型检测方法的检测结果100%符合，2种方法均检出地贫基因突变IVS-Ⅱ-654 (C>T)、-28(A>G)、CD17 (A>T)、CD26 (G>A)、CD41/42 (-TTCT)、--αSEA、-α3.7、--α4.2、αCSα，所有结果均与使用静脉血提取DNA作为标本的检测结果100% 符合，覆盖了目前临床上常见的各种基因型。结论DBS标本对运输、保存要求较低，结合自动化核酸提取仪提取DNA，操作简单、提取结果稳定，可用于临床筛查地贫基因。

    干血斑；地中海贫血；DNA 提取；荧光PCR 熔解曲线法

    地中海贫血(地贫)即珠蛋白生成障碍性贫血，为一种常染色体隐性遗传病，是由珠蛋白基因的缺失或者点突变，使珠蛋白肽链合成障碍或速率降低、血红蛋白产量减少所引起的一组常染色体隐性遗传性溶血性贫血[1-2]。该病是我国南方常见的遗传性贫血病，在我国广东、广西、四川多见，长江以南各省区有散发病例[3]。目前对地贫尚无有效的治疗方法，因此通过婚检及产前筛查等途径进行大规模的人群筛查和诊断，发现携带地贫基因的夫妻，在妊娠早期进行产前基因诊断，对产前诊断为中重型地贫的胎儿进行终止妊娠，是防止中重型地贫儿出生、提高出生人口素质的有效措施。目前，裂口PCR、反向点杂交、实时荧光PCR熔解曲线法等相关技术已成为当下最普遍的地贫诊断方法[4]。现阶段，临床用于地贫基因诊断的标本主要来自受检者的静脉血。但是，这种方法在标本采集、分离、保存和运输过程中不可避免地会遇到一些难题。此外，受生物危险品运输限制，全血需专人冷链运输。随着我国产前筛查、新生儿筛查力度的不断增强 ......