侯文汇 李银广 李珠玉 李婕 方利元 李小青 游泽山

    基础研究论著

    不明原因复发性自然流产患者FOXP3基因蛋白表达与启动子甲基化水平之间关系的研究

    侯文汇 李银广 李珠玉 李婕 方利元 李小青 游泽山

    目的探讨不明原因复发性自然流产(URSA)患者蜕膜组织中叉头样转录因子P3(FOXP3)基因的蛋白表达水平及其与启动子甲基化水平的关系。方法利用蛋白印迹法检测20例URSA患者(URSA组)和20名正常妊娠主动要求人工流产术的健康妇女(正常对照组)蜕膜组织中FOXP3蛋白表达情况，利用结合重亚硫酸盐的测序法(BSP)检测2组FOXP3基因启动子甲基化情况，并分析两者的相关性。结果URSA组蜕膜组织中FOXP3表达水平明显低于正常对照组(P材料和方法

    一、标本

    1.URSA组

    2012年至2014年在中山大学附属第一医院黄埔院区行清宫术的RSA患者，年龄25～41岁，中位年龄32岁。按以下标准纳入：流产次数≥2次，流产均发生在孕12周以前，胚胎绒毛染色体核型正常，绒毛全基因组高通量测序无微缺失或微重复。排除常见的夫妇双方染色体异常、女方生殖道畸形、基础性激素及黄体功能异常、男方精液检查异常。本研究选择符合标准的20例患者作为实验组。

    2.正常妊娠主动要求人工流产患者(正常对照组)

    同期在中山大学附属第一医院黄埔院区正常妊娠主动要求人工流产术的健康妇女，年龄25～41岁，中位年龄31岁，孕8～12周。按以下标准纳入：至少有1次成功妊娠史，无自然流产或死胎史，此次B超显示正常，绒毛染色体核型正常，绒毛全基因组高通量测序提示无微缺失或微重复。本研究选择符合标准的20例患者作为对照组。

    3.标本采集

    于清宫术中取出2组患者的胎盘蜕膜组织，洗净，迅速放入液氮中冻存，并转入-80℃冰箱保存。本研究经中山大学伦理委员会批准，每位参与者均被详细告知研究内容并签署知情同意书。

    二、主要试剂

    包括基因组DNA提取试剂盒(Qiagen，德国)、DNA亚硫氢酸盐处理纯化试剂盒(Qiagen，德国)、DNA凝胶回收试剂盒(Qbiosource，美国)、Amp(Amresco，美国)、DH5a感受态细胞(广誉生物，中国)、蛋白提取液(碧云天生物，中国)、十二羟硫酸钠(SDS，广州威佳)、甲醇 (广州化学试剂厂)、吐温-20(Sigma，美国)、脱脂奶粉(伊利)、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Bio Rad，美国)、兔抗人FOXP3多抗(CST 美国)、辣根过氧化物酶偶联的羊抗兔二抗(博士德 ......