王萱 易寰 刘佳 李敏 彭福华

    基础研究论著

    慢病毒介导BTLA转染未成熟树突状细胞的研究

    王萱 易寰 刘佳 李敏 彭福华

    目的 探讨构建携带B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)基因的慢病毒载体转染未成熟树突状细胞(DC)的可行性。方法根据GeneBank公布的小鼠BTLA的mRNA序列构建ORF慢病毒表达质粒，合成BTLA基因的重组慢病毒载体。原代分离培养CL57/BL小鼠骨髓来源的未成熟DC，用包含BTLA基因的重组慢病毒载体以感染复数为15转染至未成熟DC。采用免疫荧光、反转录PCR检测BTLA基因的表达。结果成功构建有活性的慢病毒载体LPP-Mm26645-Lv203-400，慢病毒滴度为3.25×109TU/ml。以重组慢病毒LPP-Mm26645-Lv203-400转染未成熟DC 96 h后在荧光倒置显微镜下可观察到被感染的阳性细胞有绿色荧光蛋白表达，反转录PCR检测到感染的DC中BTLA基因的表达量比未感染的DC的表达量高(P<0.05)，提示转染成功。结论构建携带BTLA基因的慢病毒载体可成功转染BTLA至小鼠骨髓来源的未成熟DC。

    B和T淋巴细胞衰减因子；慢病毒；树突状细胞；基因转染

    B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)是免疫球蛋白超家族的一员，是CD28家族被发现的第3个抑制性分子，与相应受体疱疹病毒侵入介质(HVEM)结合提供抗原特异性T淋巴细胞活化的第二信号，在免疫反应早期阶段发挥重要的协同抑制作用[1]。树突状细胞(DC)是体内最强的专职抗原提呈细胞(APC)，在免疫系统中起中心调节作用[2]。DC不同表型对T淋巴细胞接受抗原刺激的反应状态有决定性作用，未成熟DC因缺乏共刺激分子表达，不能提供T淋巴细胞活化必需的第二信号，往往导致T淋巴细胞无能或凋亡，诱导免疫耐受，因此成为近年来研究的热点[3]。未成熟DC诱导抗原特异性免疫耐受并维持其耐受状态，对自身免疫性疾病和移植后排斥反应的预防和治疗具有重要意义，但是单纯的DC治疗难以达到理想效果[4]。BTLA负性共刺激分子修饰未成熟DC，抑制T淋巴细胞的活化过程，可增强免疫耐受。在本研究中，我们构建了BTLA慢病毒表达载体转染未成熟DC，以探讨此法转染BTLA至未成熟DC的可行性，从而为进一步研究BTLA修饰的未成熟DC的免疫耐受作用提供实验基础。

    材料与方法

    一、材料与动物

    含葡萄糖、谷氨酰胺、丙酮酸钠的DMEM培养基，含L-谷氨酰胺和25mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的RPMI1640培养基、NQBB胎牛血清、青霉素-链霉素双抗、IL-4(IL-4Pepro Tech)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF Pepro Tech)、小鼠抗小鼠MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD11c单克隆抗体(eBioscience) ......