蒋梦萍 禤婕滢 徐春 罗千江 尉秀清

    510630 广州，中山大学附属第三医院消化内科

    β-arrestin2在内毒素诱导的肝脏损伤中的作用

    蒋梦萍禤婕滢徐春罗千江尉秀清

    510630 广州，中山大学附属第三医院消化内科

    【摘要】目的探讨β-arrestin2在内毒素诱导的肝脏损伤中的作用机制。方法建立内毒素诱导的肝脏损伤模型，将β-arrestin2基因敲除型(KO)小鼠20只及同窝β-arrestin2野生型(WT)小鼠20只分别随机分成实验组及对照组(n=10)，实验组腹腔内注射脂多糖(5 mg/kg)，而对照组注射等量生理盐水，6 h后留小鼠血清和肝脏组织标本。实时定量PCR检测小鼠体内 β-arrestin2表达量，ELISA检测各组小鼠血清中ALT、AST及TNF-α水平，蛋白免疫印迹法检测各组β-arrestin2、p-p65及p-IкBα蛋白的表达。结果β-arrestin2 WT 实验组肝脏组织中 β-arrestin2 mRNA为0.18±0.06，明显低于正常对照组的1.00±0.29(t=-4.669，P一、 实验动物

    C57BL/6J背景的β-arrestin2+/-雌雄配对小鼠由美国杜克大学医学中心Robert J.Lefkowitz教授馈赠，在中山大学附属第三医院疫苗研究所动物中心按SPF级培育，该动物实验获得该院医学伦理委员会批准。

    二、 实验试剂和仪器

    1.主要实验试剂及抗体

    脂多糖(Sigma，US)，ALT试剂盒(Cusabio，武汉)，AST试剂盒(Cusabio，武汉)，TNF-α ELISA试剂盒(Cusabio，武汉)，蛋白质定量试剂盒(Genstar，北京)，组织RNA提取试剂盒(Magen，北京)，qPCR逆转录试剂盒(TOYOBO，上海)，30%丙烯酰胺(BIO-RAD, US)，过硫酸钠(BIO-RAD，US)，TEMED(BIO-RAD，US)，β-arrestin2抗体(美国杜克大学医学中心Robert J.Lefkowitz教授馈赠)，p-p65抗体(Cell Signaling Technology，US)，p65(Santa Cruz，US)，p-IкBα(Santa Cruz, US)，IкBα(Santa Cruz, US)，GAPDH(Santa Cruz，US)等。

    2.主要仪器

    低温高速冷冻离心机(Eppendorf公司，Germany)，SDS-PAGE电泳槽(BIO-RAD ......