朱军 吴本权 杨洋 朱家馨 张天托

    510630广州，中山大学附属第三医院呼吸内科，内科ICU

    MRSA对巨噬细胞系RAW264.7自噬的影响

    朱军吴本权杨洋朱家馨张天托

    510630广州，中山大学附属第三医院呼吸内科，内科ICU

    【摘要】目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染对于巨噬细胞自噬的影响。方法以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象，以革兰阳性菌MRSA感染3 h组作为实验组，设立空白对照组(对照组)，另设MRSA感染0、30、60、120、150、180 min组。以MRSA感染细胞后，荧光定量PCR检测自噬相关基因5(ATG5)、ATG7、ATG12的表达情况，蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况。结果感染MRSA 3 h后，实验组RAW264.7细胞中ATG5、ATG7、ATG12的mRNA表达水平均高于对照组(P均0.05)。ATG7、ATG12 mRNA和LC3及Beclin1蛋白相对表达量均在感染MRSA 180 min组最高，ATG5 mRNA在感染MRSA 150 min组最高。结论MRSA可以诱导巨噬细胞发生自噬，自噬基因激活存在先后顺序，自噬可能为巨噬细胞吞噬胞外菌MRSA的另一种免疫灭活形式。

    【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；巨噬细胞；自噬

    自噬是与真核生物关系密切的基础生理过程，通过细胞自我消化累积的蛋白质细胞器等各类复杂的细胞质成分，从而调节控制真核生物细胞内成分的数量与质量。现今，已有自噬与各种疾病的关系研究[1]。随着近年研究的逐步深入，巨噬细胞的自噬对于清除胞内病原体有何重要作用逐渐受到关注[2-3]。自噬的作用机制在肺部疾病中，尤其在COPD、特发性肺纤维化、肺结核等疾病中已有较透彻的研究[4]。关于自噬与肺部感染性疾病，如胞外菌感染的研究仍较少。近年，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为引起医院内和社区相关性感染的重要致病菌之一，其治疗形式较为严峻[5]。已有研究发现，自噬可以清除某些胞内菌，如李斯特菌、沙门菌和结核分枝杆菌[6]。对于胞外菌MRSA感染细胞，巨噬细胞除吞噬外能否产生自噬的相关研究仍较少。本研究以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为对象，观察自噬在MRSA肺部感染中的作用，旨在探讨MRSA感染巨噬细胞对其自噬功能的影响。

    材料与方法

    一、材料

    1. 细胞系及菌株

    小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7购于中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心；MRSA菌株为由我院呼吸科实验室分离鉴定的临床菌株 ......