黄昱昊 何敏彤 杨圳冲 廖智恒 许衍扬 李梦圆 柳嘉欣 顾怀宇

    纳米金颗粒对大鼠血脑屏障结构的影响

    黄昱昊何敏彤杨圳冲廖智恒许衍扬李梦圆柳嘉欣顾怀宇

    510080 广州，中山大学中山医学院人体解剖学教研室

    【摘要】目的观察颈静脉注射纳米金颗粒对大鼠血脑屏障结构的影响。方法经颈静脉向大鼠注射50 nm金颗粒。分别在1、2、3、4、5、6 h时收集大鼠脑脊液，采用电感偶合等离子体质谱仪检测脑脊液纳米金颗粒浓度。在注射纳米金颗粒6 h后取脑组织并固定制片，在透射电镜下观察纳米金颗粒及脑组织的超微结构；大鼠脑组织制作切片后经普鲁士蓝染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色，在光镜下观察大鼠血脑屏障的出血情况和完整性。结果大鼠脑脊液中纳米金颗粒浓度随时间延长逐渐升高，并在3 h后趋于稳定；电镜下可见大鼠脑细胞布满纳米金颗粒，超显微结构有一定改变；光镜下，大鼠血脑屏障在普鲁士蓝染色后可见出血点，在免疫组织化学染色和免疫荧光染色后可见血管缺损。结论纳米金颗粒可透过血脑屏障并造成微小出血点及血管微小缺损。

    【关键词】纳米颗粒；血脑屏障；大鼠；透射电镜

    近年来，中枢神经系统疾病成为国内外的研究热点，例如癫痫、帕金森综合征、阿尔茨海默病等。但大部分药物由于不能透过血脑屏障到达靶标，使得中枢神经系统疾病的治疗成为难点。虽然血脑屏障有效阻挡了毒物进入中枢神经系统，使其保持相对稳定，但同时也阻碍了药物进入中枢神经系统发挥药效[1-2]。纳米材料作为药物载体，不仅可与多种药物结合透过血脑屏障作用于中枢神经系统，而且可精确控制药物释放时间和空间[3-4]。纳米技术将会广泛运用于临床，但其作用机制和安全性仍未完全阐明。为此，本研究予大鼠注射纳米金颗粒，并对其血脑屏障的结构变化进行一系列的观察，现报告如下。

    材料与方法

    一、实验动物及分组

    16只SPF级雄性SD大鼠，体质量180～250 g，购于广东医学动物实验中心。将大鼠分为实验组和对照组，每组各8只，遵循中山大学实验室动物管理规范饲养，大鼠适应性饲养2周。

    二、主要药品和试剂

    包括50 nm金颗粒(中国科学院国家纳米科学中心)、Claudin-5多克隆抗体(美国Sigma公司)、免疫组织化学试剂盒(北京中衫金桥生物技术有限公司)。

    三、实验方法

    1. 纳米金颗粒解聚

    将纳米金颗粒悬液用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至0.5 mg/ml，振荡，然后用数控超声波仪在功率300 W、水温25～30℃时超声解聚3次 ......