袁忠民 梁琳 唐晓梅

    ·基础研究论著·

    组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响

    袁忠民梁琳唐晓梅

    目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)对胶质瘤细胞增殖及E2F1表达的影响。方法体外培养胶质瘤细胞U251，用2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b转染细胞，空载体BS/U6为对照，噻唑蓝比色法及核染色法检测细胞增殖率；TSA处理U251细胞2 h、4 h、8 h，及多种HDACIs包括曲古菌素A(TSA)TSA、伏立诺他(SAHA)、M344、丁酸钠(NaBu)NaBu、丙戊酸(VPA)、苯甲酰胺(M344)处理细胞8 h，二甲基亚砜(DMSO)处理为对照，蛋白免疫印迹法检测E2F1表达；用TSA处理8、12、24 h，DMSO处理为对照，噻唑蓝比色法分析细胞增殖率；采用多种HDACIs(TSA，SAHA, NaBu, VPA，M344)处理细胞24 h，噻唑蓝比色法分析细胞增殖率。结果与BS/U6比较，2个E2F1干扰质粒she2f1a和she2f1b都能沉默E2F1表达和抑制细胞增殖(P0.05)，但TSA处理12 h能抑制细胞增殖(P材料与方法

    一、U251细胞培养

    神经胶质瘤细胞株U251的培养参考已发表文章进行[6]。U251细胞购自中科院上海细胞库。培养基为高糖DMEM(美国Invitrogen公司)加10%胎牛血清(美国Hyclone公司)。

    二、U251细胞转染

    转染参照Thermo公司的说明书，当U251细胞生长至融合度70%以上时，用Turbofect Transfection Reagent分别将质粒BS/U6、she2f1a、she2f1b转染到U251细胞内，于37℃恒温箱培养48 h。转染细胞分为3组，转染BS/U6作为对照组，2个E2F1干扰质粒为she2f1a组和she2f1b组(24孔板，每孔0.5 μg)。质粒BS/U6、she2f1a，she2f1b的靶序列参照已发表文章设计[5]。

    三、细胞加药处理

    参考已发表文章进行[6]。用胰酶消化U251细胞，种入24孔板，当细胞生长至融合度为50%～60%时，将细胞分为对照组[二甲基亚砜(DMSO, Sigma)处理]和组蛋白去乙酰化酶抑制剂组(分别用TSA、M344、NaBu、VPA处理)，分别处理8、12、24 h后进行噻唑蓝比色法分析或Hoechst 33258核染色后计数细胞数。

    四、蛋白免疫印迹

    参考已发表文章进行[7] ......