mmiR124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1/2细胞软骨分化的研究(1)
mmiR124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1,2细胞软骨分化的研究,微小核糖核酸124,骨髓间充质干细胞,活化T细胞核因子c1
【摘要】目的研究miR124是否通過调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化。方法培养C3H10T1/2细胞，行软骨诱导分化，采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平。使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA 的3端非翻译区(3’UTR)结合位点，构建NFATc1 3UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体，检测双荧光素酶报告基因，观察miR124对NFATc1 3UTR荧光素酶活性的影响。转染miR124模拟物或抑制物并进行软骨诱导，观察miR124对NFATc1的调控作用。结果与诱导前比较，成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均<001)；Sox 9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均<0001)；Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达，而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达。NFATc1 mRNA的3UTR与miR124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列。转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中，加入miR124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR124抑制物者 ......
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