易小友 何容涵 廖瑛扬 王哲 江诗海 王昆

    关节纤维化是指关节手术或者关节长期制动导致的主动或被动的关节活动度(ROM)的丧失，临床表现为持续性的主动及被动活动受限[1]。关节纤维化发生的机制目前尚未明确，公认的是，关节周围原位成纤维肌活化并转化为肌成纤维细胞[1-3]。组织学上主要表现为α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性的肌成纤维细胞活化、聚集并分泌大量以Ⅰ型胶原为主的细胞外基质成分。因此，阻断成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化、减少细胞外基质的沉积成为治疗关节纤维化的主要方向。

    含t复合多肽伴侣素亚基(CCT)是广泛存在于真核细胞胞质中的一种重要分子伴侣，以维持相关蛋白在细胞内的正常功能[4-6]。任何亚基的变化均会导致细胞不同的生物学改变。前期研究显示，CCT-7在成纤维细胞的活化过程中是高表达的，另有研究也显示CCT-7在皮肤瘢痕形成、关节纤维化过程中亦是高表达的[4-6]。有研究显示CCT-6参与皮肤瘢痕的形成[7]。CCT-6可以分为6a和6b。在肺的非小细胞肺癌中，CCT-6a已被证实能够通过转化生长因子-β(TGF-β)通路调节癌细胞的代谢，而TGF-β信号通路具有最强的致纤维化作用[8-10]。Rommelaere等[11]在动物的睾丸中最早发现CCT-6b高表达，但笔者见目前CCT-6b在纤维化方面缺乏相关研究，因此在本研究中，通过筛查关节纤维化的成纤维细胞中CCT家族各个亚基的表达，探索各亚基在关节纤维化中的可能作用，为临床上治疗关节纤维化指明方向。

    材料与方法

    一、主要实验试剂

    全蛋白提取试剂盒、蛋白定量试剂盒、细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8试剂盒)购自Keygen公司，总RNA提取试剂盒购自Invitrogen公司，实验抗体均购自Abclonal公司，一步法PCR试剂盒购自Takara公司，引物合成由谷歌生物公司合成。

    二、方 法

    1.关节纤维化动物模型的建立

    本动物实验通过中山大学附属第三医院医学伦理委员会批准。成年SD大鼠(雌性)12只，体质量280～320 g，取其右下肢为固定组，左下肢为对照组。固定组以1%戊巴比妥钠5 ml/kg腹腔注射麻醉后，沿膝关节内侧切开皮肤，分离皮下组织和肌肉，显露股骨远端、膝关节内侧及胫骨近端。保持膝关节屈曲至45°左右时放置聚甲醛树脂板(POM板)，以1.1 mm电钻于股骨内侧远端、胫骨内侧近端钻孔 ......