朱恒梅 祝胜郎 陈结慧 杨芸 李金艳

    糖尿病肾病(DN)是一种以肾小球系膜增宽及小球硬化为特征的疾病，是导致终末期肾病的主要原因之一[1]。组织型纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制物-1(tPA/PAI-1)是主要的纤溶酶原/纤溶酶系统，不仅能直接降解细胞外基质，还能激活金属蛋白酶间接降解细胞外基质，在糖尿病肾小球硬化中发挥重要作用[2]。多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)是一类能选择性识别并结合DNA缺口的DNA结合蛋白酶[3-5]。笔者前期研究显示，高糖可通过过度激活PARP诱导tPA/PAI-1功能紊乱，促进细胞外基质增生，提示其在糖尿病病程中可能发挥重要作用[6-8]。微小核糖核酸(miR)是一类高度保守的非编码单链RNA分子，约由22个核苷酸组成，能与靶基因3’-非编码区特异性结合，在转录后水平调控基因的表达，从而导致靶mRNA降解和翻译阻遏。既往研究显示，多种miR在糖尿病中异常表达[9-12]。目前研究发现，miR-222是重要的肿瘤相关基因，调控肿瘤细胞周期、增殖及侵袭[13]。近期有研究表明，miR-222可能参与糖尿病的发生[14-15]。Neijenhuis等[16]报道，hsa-miR-222能增强PARP-1抑制剂对癌细胞PARP-1的敏感性。因此，本研究以人肾脏系膜细胞(HMC)作为研究对象，探讨miR-222在高糖致tPA/PAI-1紊乱中对PARP-1的调控作用。

    材料与方法

    一、 材 料

    人HMC由吴斯佳硕士惠赠。D-Glucose购自Sigma公司，miR-222模拟物(miR-222 mimics)hsa-miR-222成熟体序列(5’-AGCUACAUCUGGCUAC-UGGGU-3’)、阴性对照(5’-AAAAGAGACCGGUUCACUGUGA-3’)均购于上海吉玛生物公司；miR VanaTMPARlSTM试剂盒购自ABI公司、iScripTM模板DNA合成试剂盒购自BIO-RAD公司、QPCR荧光定量试剂盒购自Takaka公司 ......