张娟 李雪 蒋浩 黄晓萍

    宫颈癌在全球女性常见恶性肿瘤中居第四位，在发展中国家常见恶性肿瘤中居第二位。当前的治疗策略包括手术切除、化学治疗和放射治疗，但疗效均有限。如何预防与治疗宫颈癌是全球医学工作者们共同关注的课题。竹节香附素A(RDA)是从常用的传统中草药海葵中提取的一种活跃三萜皂苷，通过抑制肿瘤细胞增殖和血管生成产生抗肿瘤活性，同时能诱导多种肿瘤细胞凋亡，如大肠癌细胞、胃癌细胞和肝癌细胞。磷脂酰肌醇3 激酶/蛋白激酶B/ 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路是一条常见的细胞信号通路，由于mTOR 能调节细胞代谢活动，因此被作为抑制肿瘤细胞生长的靶点。有研究者发现，RDA 可能通过激活p38MAPK 通路和抑制mTOR 活化诱导胃癌细胞凋亡。RDA 在宫颈癌中未有相关报道。因此，本研究探究RDA 对人宫颈癌HeLa 细胞增殖和凋亡的影响，并初步探讨其可能的作用机制。

    材料与方法

    一、主要材料

    人宫颈癌HeLa 细胞，购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。RDA，纯度≥98%，购自上海源叶生物科技有限公司，批号20190203；胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，纯度≥98%，货号PHG0078，购自美国Gibco 公司。

    二、主要试剂和仪器

    高糖DMEM 培养基、胎牛血清，均购自美国Gibco 公司；B 细胞淋巴瘤2 家族蛋白(Bcl-2)抗体、β-actin 抗体、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)抗体、活化胱天蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)抗体、mTOR 抗体、PI3K 抗体、Akt 抗体、羊抗兔二抗均购自艾博抗(上海)贸易有限公司。

    BA400Digital 数码三目摄像显微镜为麦克奥迪实业集团有限公司产品，Image-Pro Plus 6.0 图像分析软件为美国Media Cybernetics 公司产品，SpectraMAX Plus384 酶标仪为美谷分子仪器有限公司产品，Cytoflex 流式细胞仪为美国贝克曼库尔特公司产品。

    三、方 法

    1.细胞培养

    将已经冻存HeLa 细胞株快速在37 ℃下解冻后，加入适量高糖DMEM 完全培养基(10%胎牛血清+0.5%青链霉素双抗)，调整细胞密度为1×10/mL，在37 ℃、5%CO的培养箱中连续培养72 h，中途更换完全培养基2～3 次，然后进行传代备用。

    2.实验分组

    浓度筛选试验：将细胞分成5 组(0、5、10、20 和40 μmol/L) ......