陈丽玲 徐振健 徐安平

    间充质干细胞(MSC)具有自我更新、多能分化和免疫调节的作用。近年研究显示，MSC 可在包括变应性结膜炎、变应性鼻炎、急性青光眼、阿尔茨海默病和1 型糖尿病等多种疾病中发挥治疗作用。MSC 可以从不同的组织中分离出来，包括骨髓、脐带、胎盘、脂肪组织和人的牙龈。牙龈MSC(GMSC)是一种从牙龈组织中获得的MSC 亚群，2009 年Zhang 等首次从人牙龈组织中分离出GMSC，并证实了其表型及功能活性。与其他MSC 类似，GMSC 也具有抑制炎症和调节免疫反应的作用。小鼠和人源化动物模型研究显示，GMSC 能够通过减少效应性T 淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、破骨细胞和增加调节性T 淋巴细胞等治疗包括类风湿关节炎、1 型糖尿病、SLE、动脉粥样硬化等多种疾病。既往文献提及的小鼠GMSC 的提取方法需使用多种酶及复杂的培养基等。本研究以C57BL/6 小鼠进行实验，旨在建立更为简便、高效的GMSC 体外提取及培养体系，现报道如下。

    材料与方法

    一、动 物

    SPF 级C57BL/6 小鼠5 只，雌雄不限，8～10周龄，体质量15～20 g，购自广东省医学实验动物中心。实验过程中严格遵循减少、替代、优化的伦理规范操作，做到充分考虑动物的利益，善待动物，防止或减少动物的应激、痛苦和伤害，尊重动物生命，采取痛苦最少的方法处置动物。

    二、主要试剂

    包括：α-MEM 培养基、青霉素-链霉素双抗溶液、胎牛血清(FBS)，均购自美国Gibco 公司；Ⅳ型胶原酶、地塞米松、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、吲哚美辛、人胰岛素、油红O 染液，均购自美国Sigma 公司；细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8 法)购自美国APExBio 公司；结晶紫染液、茜素红染液，均购自上海碧云天生物技术有限公司；抗小鼠流式抗体CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105，均购自美国BD 公司。

    三、培养液配制

    原代细胞培养液为α-MEM 培养基+20%FBS ......