陈海堡 宋毅昌 彭磊 曾统 张迪 靳松

    骨肉瘤是世界上最常见的儿童骨恶性肿瘤，也是儿童恶性肿瘤死亡的第八大原因。随着治疗理念及技术的改进，骨肉瘤患者的5 年总体生存率明显提高，但治愈率未有提高，而且出现转移或复发患者的预后较差。分子靶向治疗是骨肉瘤的治疗新策略，识别新的靶点和驱动骨肉瘤发病的潜在分子机制至关重要。IL-37 是近年被发现的IL-1 家族成员，具有天然的炎症和免疫抑制作用，与调控肿瘤的增殖和转移相关。然而IL-37 在骨肉瘤中的生物学功能尚未被阐明。B 淋巴细胞瘤(BCL)家族蛋白是细胞凋亡的重要调控因子，其通过调节线粒体通透性来调节凋亡激活物如细胞色素C 的释放来影响细胞的状态，BCL-2 家族包括促凋亡蛋白BCL 关联X 蛋白(BAX)和抗凋亡蛋白BCL-2。Wnt/β-catenin 通路是骨肉瘤中常见的信号通路，在调节肿瘤细胞增殖、转移等方面发挥重要作用。在正常的体细胞中，β-catenin仅作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与钙黏蛋白形成复合体,在维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动中发挥作用。当细胞外Wnt 信号分子与细胞膜上特异性受体Frizzled 蛋白结合后，激活胞内蛋白Dvl。Dvl 通过抑制糖原合成酶激酶3β(GSK3β)等蛋白形成的β-catenin 降解复合物的降解活性，稳定细胞质中游离状态的β-catenin 蛋白。胞浆中稳定积累的β-catenin 进入细胞核后结合淋巴增强因子/ T 细胞因子(LEF/TCF)转录因子家族，启动下游靶基因如转录增强因子1(TEF1)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)等的转录。为此，本研究中通过定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测IL-37 在骨肉瘤细胞中的表达，并且进一步探讨IL-37 对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及与Wnt/β-catenin 信号通路关系，为骨肉瘤的靶向治疗提供新的证据，现报道如下。

    材料与方法

    一、主要材料

    本实验所用的人类正常成骨细胞系(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63、Saos-2)均购于中国科学院；10%胎牛血清(FBS)购自美国HyClone 公司；高糖型DMEM 培养基、谷氨酰胺购自美国Gibco 公司；胰酶、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)、青霉素-链霉素混合液(双抗)、β-甘油磷酸钠、地塞米松、细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8 法)购自美国Sigma 公司；逆转录(RT)试剂盒及qPCR 试剂盒、TRIzol RNA 抽提试剂、Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒购自美国Invitrogen 公司；Transwell 孔板购自美国Corning 公司；IL-37(ab93959 ......