万志平 杨小安 邓洪

    目前，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界上慢性肝病的最常见原因，影响着全球近25%的人口。NAFLD 是指排除酒精和其他明确的肝损害所致的、以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性为主要特征的临床病理综合征。其疾病谱包括单纯性肝脏脂肪变性(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化以及肝细胞癌。NASH 的病理表现有肝细胞脂肪变性、气球样变，巨噬细胞活化浸润等。肝脏中的巨噬细胞群由肝巨噬细胞和单核细胞衍生的浸润性巨噬细胞组成，它们根据接收到的信号分化为M1 型或M2 型巨噬细胞，表达相应的分子标志物，以调节肝脏炎症反应。肝细胞脂肪变性是NAFLD 的早期事件也是NASH 发生及进展的前提条件，而巨噬细胞的活化与NASH 的发生和发展密切相关。目前巨噬细胞活化的机制仍未完全阐明。近年细胞外囊泡(EV)引起了研究人员的广泛关注。EV 是一种微小的膜囊泡，具有脂质双层膜结构，直径为30～150 nm。绝大多数细胞都能分泌EV，而且来自不同细胞类型的EV 可以将特征性蛋白质、脂质和核酸转运到受体细胞，从而发挥不同的生物学效应。细胞间的通信除旁分泌途径外，还可以由EV 介导，因此不能忽视EV 在NASH 发生、发展中的作用。本文探讨由脂肪变性肝细胞分泌的EV对巨噬细胞活化的影响，为深入理解EV 在NASH发生、发展中的作用提供理论基础。

    材料与方法

    一、NASH 动物模型的构建

    10 只6～7 周龄(体质量180～200 g)的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠购自广州中医药大学，饲养于温度可控的无病原体环境中，光照/黑暗循环12 h，能自由获取食物和水。经过1 周的适应性喂养后，SD 大鼠按体质量匹配分为常规饮食组(Control 组，n = 5)和高脂肪高胆固醇(HFHCD)饮食组(HFHCD 组，n = 5)，分别予常规饲料和HFHCD 饲料喂养。24 周后Control 组和HFHCD组大鼠禁食过夜，施以安乐死后收集它们的肝脏，并储存在-80 ℃冰箱。所有的动物实验均经过中山大学实验动物伦理委员会的批准(批件号：IACUC-AEWC-F2008032)，并符合《动物研究：体内实验报告(ARRIVE)指南》以及美国国立卫生研究院的实验动物护理和使用指南。

    二、细胞模型的构建

    人肝癌细胞系(HepG2 细胞)培养在含有10%胎牛血清的DMEM 培养基中。当HepG2 细胞生长密度达到80%时，将细胞铺至6 孔板，分别添加不同浓度的棕榈酸(PA) ......