张璇 马里程 孙龙啸 张磊

    腺样囊性癌(ACC)又称圆柱瘤或圆柱瘤型腺癌，ACC 占涎腺肿瘤的5%～10%，在涎腺恶性肿瘤中占24%。涎腺ACC(SACC)是生长缓慢但恶性程度高的涎腺上皮性肿瘤，好发于腮腺、颌下腺、舌下腺以及腭腺等小涎腺，具有局部侵袭性强、血行性转移率高、长期预后差等典型生物学特征。铂类药物作为ACC 的一种治疗方法已被广泛探索，但收效甚微。研究表明，组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)-亚依洛尼酰胺异羟肟酸和顺铂(DDP)的联合治疗通过激活细胞衰老来消耗肿瘤干细胞并有效降低ACC 原代细胞的肿瘤活性。有研究表明，沉默长链非编码RNA(lncRNA)X 非活性特异转录本(XIST)抑制非小细胞肺癌的生长并提高DDP 药物的敏感性。lncRNA XIST 参与了胃癌细胞耐药的发生，而其在SACC 中的作用尚未见报道。有研究表明，在多种癌症中miRNA(miR)- 429 表达下调，发挥抑癌作用，但其在ACC 中的作用未见报道。miR-429是参与口腔鳞癌DDP 耐药的关键miRNA。本研究旨在探索干扰lncRNA XIST 是否能通过上调miR-429 来影响SACC 细胞的生长和对DDP 的敏感性。

    材料与方法

    一、材 料

    人SACC 细胞系SACC-83、ACC-2 和正常下颌下腺细胞HSG 均购于中国科学院上海生命科学学院细胞资源中心。1640 培养基、胎牛血清均购于Sigma 公司，TRIzol 购于Ambion 公司，RT 试剂盒购于TaKaRa 公司。Lipofectamine 2000 购于Invitrogen 公司，shRNA-XIST、 shRNA-NC、mimic-NC、miR-429 mimic、 NC inhibitor 和miR-429 inhibitor由广州锐博生物科技有限公司合成。CCK-8 试剂盒、Quick Mutation基因定点突变试剂盒和TUNEL 试剂盒均购于上海碧云天生物技术有限公司。双萤光素酶报告基因载体、萤光素酶检测试剂盒均购于Promega 公司。抗体购于Cell Signaling Technology公司。

    二、方 法

    1. 细胞培养

    将人SACC 细胞系SACC-83、ACC-2 和正常下颌下腺细胞HSG 以及DDP 耐药 SACC-83/DDP细胞置于RPMI-1640 培养基中，加入 10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 μg/mL 链霉素，放进37 ℃、5% CO饱和湿度的细胞培养箱培养 ......