张坤 李芳 肖东杰 高德海 孙志军 刘华

    随着细胞生物学的进步，细胞治疗作为一种新型疗法登上历史舞台，其中间充质干细胞(MSC)在新型冠状病毒肺炎、脊髓损伤等难治性疾病中取得了显著进展[1-2]。MSC 已被证实可从多个组织器官中分离获得。而取材脐带及胎盘的MSC 由于无需采取有创性操作，属于产后医疗废弃物，其体外提取简单，不受伦理限制，低免疫源性，成为较好的MSC 种子细胞来源。不同组织来源和培养条件的MSC 具有不同的生物学特性，这成为影响MSC 药品研发的挑战与难点。近年来，有研究比较了不同MSC 的生物学特性，例如扩增能力、表面标记能力、多向分化能力、免疫调节及基因表达差异等[3-4]。尽管MSC 的具体治疗机制尚不清楚，但MSC 分泌的细胞因子在促进组织再生和调节免疫应答方面都发挥重要作用[5]。

    本研究的目的是使用人细胞因子芯片检测脐带间充质干细胞(UC-MSC)与胎盘间充质干细胞(P-MSC)细胞因子的分泌情况。细胞因子表达水平的检测，有助于更好地探索MSC 的作用机制，为临床选择MSC 类型提供实验数据支持。

    材料与方法

    一、试剂与耗材

    MEM 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶-EDTA、重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)均购自美国Gibco 公司，胶原酶Ⅰ购自美国Worthington公司。鼠抗人单克隆抗体CD13-PE、CD34-PE、CD44-PE、CD45-FITC、CD73-PE、CD90-PE、CD105-FITC、HLA-DR-FITC 均购自美国BD 公司。油红O、茜素红S 染色试剂购自武汉谷歌生物科技有限公司，硝酸银试剂购自上海国药集团化学试剂有限公司。OriCellTMMSC 成脂/成骨诱导分化培养基试剂盒购自广州赛业生物科技有限公司公司。TGF-β1、ICAM-1 ELISA 试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，IL-1β ELISA 试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司。RNAex Pro Reagent、反转录试剂盒购自湖南艾科瑞生物工程有限公司，UltraSYBR Mixture 试剂购自北京康为世纪公司。细胞因子(QAH-CAA-1000)芯片购自瑞博奥(广州)生物科技股份有限公司。

    二、方 法

    1. MSC 的分离培养

    人体组织标本采集已获得济南市中心医院伦理委员会的批准(2021-093-02)，样本采集前获得所有供者知情同意，脐带取自山东第一医科大学附属中心医院产科 ......