董兴盛 王德刚 李志明 熊怡 满婷婷

    戊二酸血症Ⅰ型(GAⅠ)是一种常染色体隐 性遗传的代谢性疾病，由于戊二酰辅酶A 脱氢酶(GCDH)基因缺陷使GCDH 活性降低甚至缺失，导致戊二酸、3- 羟基戊二酸在体内蓄积，引起纹状体等神经核团损害，导致神经退行性病变[1]。本研究对GAⅠ家系中的先证者进行全外显子组测序及核心成员突变位点Sanger 测序验证，经分析确定变异为致病性，通过产前羊水DNA 的GCDH 基因分析及遗传咨询，提供优生优育指导，现报道如下。

    对象与方法

    一、一个GAⅠ家系先证者的临床资料收集

    收集一个GAⅠ家系先证者的病史和体格检查资料。本研究经中山市博爱医院医学伦理委员会审核批准(KY-2019-010-37)，先证者父母已签署知情同意书。

    二、基因测序分析

    1. 先证者外周血基因检测

    采用血液DNA 纯化试剂盒(QIAgen，德国)提取先证者及家系核心成员的外周血，具体操作按试剂盒说明书进行。利用Covaris LE220 超声波仪(Massachusetts，美国)将待测基因组DNA打断成小片段DNA，进行DNA 文库构建。利用定制的基因片段捕获探针( Roche NimbleGen，Madison，美国)进行外显子组捕获，再由高通量测序仪BGISEQ-500(华大基因，中国)完成测序。人类基因组参考序列版本选择GRCh37。变异位点Sanger 测序验证：采用 Primer5 软件设计2对引物，扩增GCDH 基因的2 个位点。引物序列：GCDH-F1 为5′-GGCTAAGTGTAAGGACCTCTGG-3′，GCDH-R1 为5′-CACCTTCGTTGCGATTGG-3′；GCDH-F2 为5′-TGACCGTCTCGCTCATCCC-3′，GCDH-R2 为5′-CCGTTGACTCAGCCCACA-3′。使用PTC-200PCR 仪(Bio-Rad，美国)进行PCR，反应条件为96 ℃预变性5 min，96 ℃变性20 s，59.8/58.4 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，38 个循环；最终72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。PCR 扩增产物通过ABI3730 全自动测序仪(美国，ABI 公司)进行正反双向测序。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)发布的遗传变异分类标准与指南对筛选出来的变异进行遗传致病性分析[2] ......