夏彦昊 刘慧玲 江洁 吴斌

    肝纤维化是一种响应于多种慢性肝损伤的肝脏自我修复过程，当损伤因素持续存在时则可能向肝纤维化甚至肝硬化进展，表现为细胞外基质成分过度增生并沉积，肝内细胞及组织结构紊乱，呈现为大小不一的无规则样再生结节[1-2]。肝星状细胞分布于肝细胞基底侧与肝窦内皮细胞之间，为纤维化细胞外基质的主要来源，肝星状细胞活化被认为是肝纤维化形成的必要细胞学基础[3-4]。当肝脏受到纤维性损伤时，肝内库普弗等细胞通过分泌转化生长因子-β(TGF-β)、TNF-α、血小板生长因子等为代表的细胞因子激活肝星状细胞[5-6]。肝星状细胞与肝细胞、肝窦内皮细胞等其他细胞构成的细胞间相互作用网络维持了肝星状细胞的持续激活[7]。

    细胞支架蛋白Arrestins 家族成员β-arrestin1(ARRB1)是一种多功能适应蛋白，其与磷酸化G蛋白偶联受体(GPCR)结合以调控受体脱敏和内吞，在许多细胞功能中起关键作用[8]。p38 属于丝裂原激活蛋白激酶家族，作为一种可异位至细胞核的转录因子激活者，是多种细胞功能调控途径的关键靶点[9]。既往研究发现，p38 的活化可诱导肝纤维化，包括血小板生长因子在内的多种细胞因子通过p38 信号转导通路激活肝星状细胞而促进肝纤维化[10]。在本研究中，笔者利用四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化模型，从肝星状细胞激活的角度，探究ARRB1 在肝纤维化中的作用，阐明ARRB1 和p38 信号转导通路诱导肝星状细胞活化从而促进肝纤维化的机制。

    材料与方法

    一、材 料

    1. 标本的收集

    收集临床上肝硬化患者的肝穿刺活组织检查(活检)样本，并收集肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织作为对照。收集到的组织样本迅速放入液氮后送至-80℃冰箱保存，以备提取蛋白质。

    2. 实验动物

    SPF 级别的C57BL/6L 雄鼠12 只，6～8 周龄。所有小鼠于中山大学附属第三医院实验动物中心进行繁育、饲养并用于实验。本动物实验伦理经中山大学实验动物管理与使用委员会审批通过(批件号：IACUC-F3-16-0317)。

    3. 主要试剂与抗体

    CCl4(Sigma，德 国)、高 糖DMEM 培 养 基(Gibco，美国)、胎牛血清(Gibco，美国)、TGF-β细胞因子(MCE，美国)、二氨基联苯胺(DAB)显色液(Vector，中国)、HE 染液及天狼星红染色液(北京雷根生物技术有限公司)、总蛋白提取裂解液(上海碧云天生物技术有限公司)、α 平滑肌肌动蛋白(α-SMA ......