李妍 齐曼曼 缴宝杰 李春雷 王春雷 常玉林

    血脑屏障受损、灌注不足、炎症因子释放等原因均会造成创伤性颅脑损伤(TBI)患者预后不佳，存活患者相关神经功能的恢复是目前的治疗难题[1]。研究显示TBI 或不全脑缺血再灌注损伤后的大鼠会出现长期且严重的情绪障碍如焦虑、抑郁等[2-3]。IL-18 是IFN-γ 诱导因子，是一种多效性辅助性T 细胞1 型促炎因子[4]。大脑对IL-18 信号尤为敏感，因为中枢神经系统中多种类型的神经细胞表达IL-18 的受体，参与调节TBI 后的神经细胞焦亡[5-6]。IL-18 结合蛋白(IL-18BP)是IL-18 的天然抑制剂，在正常情况下，足够的IL-18BP 使游离IL-18 保持低水平状态[7]。但在某些炎症性疾病中，IL-18 过量产生和释放使IL-18 与IL-18BP 之间的平衡被破坏，导致病理性炎症的发生[8]。但是IL-18BP 对TBI 后神经功能恢复的影响以及相关机制至今尚无定论。因此，本研究拟探究IL-18BP 在TBI 大鼠焦虑样行为中的作用及机制，揭示TBI 对神经系统损伤的潜在机制和治疗靶点，为临床治疗提供科学依据。

    材料与方法

    一、材 料

    1.实验动物

    本研究实验动物为7～8 周龄、体重250～300 g的清洁级雄性SD 大鼠72 只(辽宁长生生物技术股份有限公司)。本实验均按照本院动物护理与使用委员会的标准进行。本研究经本院动物评审委员会批准[伦理批准文号：2021-072-02(z)]。

    2.主要试剂

    神经元核抗原抗体(NeuN)鼠抗单克隆抗体(英国Abcam 公司)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鼠抗单克隆抗体(上海碧云天生物技术有限公司)、NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)兔抗多克隆抗体(北京索莱宝科技有限公司)、IL-18 兔抗多克隆抗体(上海碧云天生物技术有限公司)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cl-Caspase-1)兔抗多克隆抗体(英国Abcam公司)、消皮素D(GSDMD)兔抗多克隆抗体(美国Cell Singnaling 公司)、大鼠IL-18 ELISA 试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)。

    二、方 法

    1.动物分组及干预方法

    将72 只大鼠按照随机数字表法分为3 组各24只：假手术组(Sham 组)、TBI 组、TBI+IL-18BP组 ......