陈希瑶?许镇?邬喆斌?张博翔?彭亮?谢婵

    【摘要】目的 探討核仁蛋白9(NOL9)在肝癌中的表达和对肝癌细胞增殖的影响，进一步阐明NOL9在肝癌中表达上调的分子机制。方法 选择7例肝癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织)，通过蛋白免疫印迹法和反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NOL9在癌组织和癌旁组织中的表达水平；分别转染小干扰RNA(si-RNA)到肝癌Huh7和HCCLM3细胞，采用RT-qPCR、蛋白免疫印迹法、细胞集落形成实验、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析差异；利用TCGA数据库肝癌数据评估NOL9 mRNA表达水平和启动子的甲基化水平，同时评估NOL9和DNA甲基异位擦除蛋白家族(TET1、TET2和TET3)转录水平的相关性；采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹法检测DNA去甲基化试剂5-Aza-Dc处理后Huh7和HCCLM3细胞中NOL9表达水平的变化；5-Aza-Dc预处理后再转染si-RNA，采用细胞集落形成实验和CCK-8分析细胞增殖的差异。结果 NOL9在肝癌组织中表达上调；敲低NOL9能抑制肝癌Huh7和HCCLM3细胞增殖以及细胞集落形成(P均 < 0.01)；肝癌中NOL9启动子甲基化与其mRNA水平呈负相关，NOL9 mRNA水平和一个CpG区域(cg07997941)呈负相关；在肝癌中，NOL9与TET1、TET2和TET3的转录水平均呈正相关；在给予5-Aza-Dc处理后，NOL9的表达上调；5-Aza-Dc的处理能逆转敲低NOL9对肝癌细胞增殖以及克隆形成的抑制作用。结论 NOL9在肝癌组织中高表达，敲低NOL9抑制了肝癌细胞的增殖和克隆形成，其上调机制可能与启动子低甲基化相关。

    【关键词】肝细胞癌；核仁蛋白9；增殖；甲基化

    Promoter hypomethylation promotes proliferation of hepatocellular carcinoma cells by mediating NOL9 overexpression ......