杨瑜?王楠?李华?吴玲?王琪?谢贝?刘志辉?孟繁荣

    【摘要】目的 比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达，初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法 选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTBR+)、单耐异烟肼(MTBH+)、单耐链霉素(MTBS+)和单耐乙胺丁醇(MTBE+)]的菌株各10株，采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA，使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对 PCR 产物进行测序以检查正向和反向的多态性，并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果 PCR成功获得各组特异性的hspX基因，與H37Rv序列比对具有97%～99%的同一性，无存在明显差异；以相对定量2-ΔΔCt法计算获得S、MDR、MTBR+、MTBH+、MTBS+和MTBE+菌株hspX的表达分别为0.98(0.89，1.23)、1.49(1.10，2.04)、1.41(0.55，2.80)、1.37(0.68，2.71)、0.91(0.59，1.62)和0.70(0.48，1.18)。

    以敏感菌株(S)组为对照组，不同耐药型菌株组与其比较，hspX表达差异均无统计学意义(P均> 0.05)。结论 hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下，hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。

    【关键词】结核分枝杆菌；热休克蛋白；hspX基因；耐药性

    Comparison of hspX gene sequence and expression in Mycobacterium tuberculosis with different drug resistance types Yang Yu ......