耳针和六味地黄丸加味预防和治疗去势雌鼠骨质疏松的实验研究
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(贵阳医学院附属医院,贵州550004)
[摘 要] 目的:探讨耳针和中药六味地黄丸加味对绝经后骨质疏松症的防治作用及其作用机理。方法:取66只SD雌性大鼠按体重随机分为6组:假手术组、模型组、耳针组、中药组、耳针十中药组、西药组。后4组分别经耳针、六味地黄丸加味、耳针加中药联合应用以及雌二醇治疗3个月,观察耳针及中药对去势雌鼠的影响。
结论:耳针、中药皆能提高去势雌鼠的BMC、BMD,防治PMO。
[主题词] 阉割/骨质疏松绝经后/预防和控制;耳针;六味地黄汤/治疗应用ExperimentalStudyonPreventionandTreatmentofOsteoporosisinOvariectomized
RatswithAuricularAcupunctureandModifiedLiuweiDihuangPillLuoXiaoguangLiuGuozhong,HeZhigu
, 百拇医药
ang,etal(GuiyangMedicalCollege,Guizhou550004)
[Abstract] Purpose ToexplorepreventionandtreatmentactionsofauricularacupunctureandmodifiedLiuweiDihuangPillonpostmenopausalosteoporosisandtheirmechanisms.Methods Sixtysixfemaleratswererandomlydividedintosixgroupsaccordingtotheirbodyweight,pse
udooperationgroup(POG),modelgroup(MG),auricularacupuncturegroup
(AAG),Chineseherbgroup(CHG),auricularacupunctureplusChineseherbgroup(AHG)andestrogengroup(EG).ExceptforthePOG,allthegroupswereovariectomized.Aftertheoperation
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,AAG,CHG,AHGandEGweretreatedrespectivelywithauricularacupuncture,LiuweiDihuangPill(LWP),auricularacupuncturecombinedwithLiuweiDihuangPill,andestradiolbenzoas.Threemonthslater,theeffectsofauricularacupu
nctureandLiuweiDihuangPillontheratswereobserved.Results BothauricularacupunctureandLWPcanpromoteBMCandBMDinovariectomizedrats,soastop
reventandtreatPMO.Themechanismmaybeincreaseserumestrogenlevel,decrea
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seserumPTHlevelandraiseCTlevel,inhibitingboneresorption,increasingbonereformatio
nanddecreasingbonereabsorptionandthenadjustingimbalanceofbonemetabolism.
[Keywords] Castration,Osteoporosis,Postmenopausal/prev;AuricularAcupuncture;LiuweiDihuan
gDecoction/theruse
绝经后骨质疏松症(PostmenopausalOsteoporosis,PMO)是绝经后妇女的易患疾病。随着经济的发展和人口寿命的延长,这一疾病亦呈上升趋势。雌激素替代疗法(HRT或ERT)是预防和治疗PMO的首选方法,但服药时间长(5～10年)[1],并有一定副作用和危险性,如引起子宫内膜增生,子宫内膜癌和乳腺癌等[2,3]。因此,寻找能够防治PMO,经济简便,可以长期应用的药物和方法,具有重要的经济效益和社会效益。本实验采用切除6～8月龄SD雌性大白鼠双侧卵巢(即去势雌鼠)建立PMO模型,观察耳针和中药六味地黄丸加味对去势雌鼠PMO的影响,探讨耳针和中药六味地黄丸加味对PMO的预防和治疗作用及作用机理,并寻求能够替代HRT治疗PMO的可能途径。
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1 材料和方法
1.1 实验动物的分组和造模
(1)分组:66只6～8月龄SD雌性大白鼠,由贵阳医学院实验动物中心提供,体重250～290g。动物按体重随机分为6组:假手术组、模型组、耳针组、中药组、耳针+中药组、西药组,每组11只。
(2)造模:各组大鼠行3%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉,除假手术组外,其余5组在无菌条件下取左下腹侧切口进入腹腔,完整摘除双侧卵巢(切下卵巢送贵阳医学院附院病理科经病理切片证实),仔细止血,逐层缝合。假手术组只切除卵巢附近一小块脂肪组织即止血缝合。
各组动物均在相同环境中分笼饲养,每笼不超过3只,室温20℃,自由摄食和饮水。饲料由贵阳医学院实验动物中心提供。
1.2 治疗方法
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除假手术组和模型组以外,其余4组于去势第2天后开始分别进行治疗。
(1)耳针组:参照人的耳穴定位方法,取大鼠“脾”、“肾”两耳穴(“肾”:在对耳轮下脚下方后部;“脾”:在对耳轮下方,耳甲腔的后上部),穴位局部常规消毒,以皮内针刺入穴位并固定,每日检查有否脱落,脱落者即予补刺,治疗3个月。
(2)中药组:中药六味地黄丸加味是在六味地黄丸基础上加骨碎补、淫羊藿等制成,由贵州约奇制药有限公司加工浓缩成粉末状。六味地黄丸加味以成人每日剂量的10倍拌入大鼠每日饲料中,自由摄食,治疗3个月。
(3)耳针+中药组:按上面介绍方法行耳针针刺+中药六味地黄丸加味喂饲,两者联合应用。
(4)西药组:行苯甲酸雌二醇(上海第九制药厂生产,批号980601)左后肢肌肉注射,按人鼠剂量换算[4],每只鼠每次肌注0.1mg/kg体重,每周1次,治疗3个月。
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1.3 指标测定
测定大鼠右股骨骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)以及血清雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)、甲状旁腺素(PTH)、降钙素(CT)。
(1)各组动物在完成治疗3个月后股动脉采血处死,完整摘取右股骨,彻底剔除软组织后作右股骨BMC、BMD测定,所用仪器为日本进口双能X线骨密度测量仪(DCS600EXAlokaDichromaSan),由贵州省人民医院骨密度测定室协助完成。
(2)血标本经离心、收集血清,置-20℃冰箱中保存集中待测。血清E2、BGP、PTH、CT均采用放射免疫测定法(RIA)。其中E2药盒购自北京北方生物技术研究所,批号9912;BGP药盒购自中国北京东亚免疫技术研究所,PTH药盒购自北京中国原子能科学研究所,CT药盒购自中国人民解放军总医院科技开发中心放免研究所。
1.4 统计学方法
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所有参数均以珔x±s表示,使用《中国医学百科全书·医学统计学》软件统计包(第二版)进行多均值、单因素方差分析,用q检验(Newman-Keuls法)进行两两比较。
2 实验结果
2.1 各组大鼠BMC、BMD及血清E2的变化如表1所示。
造模术后3个月,模型组右股骨BMC、BMD与假手术组比较,差异具有非常显著性意义(P0.05),表明耳针、中药六味地黄丸加味或两者联合应用与西药雌激素一样,均能提高去势雌鼠的BMC、BMD值。模型组血清E2与其余各组比较,差异具有非常显著性意义(P0.05)。更进一步表明雌性大鼠去势后体内雌激素水平下降,模型成功。
2.2 各组大鼠血清BGP、PTH、CT值的比较如表2所示。
模型组血清BGP、PTH、CT与其余各组比较,差异皆具有非常显著性意义(P0.05)。表明耳针组、中药组、耳针+中药组、西药组雌性大鼠去势后分别给予耳针针刺、中药喂饲、耳针+中药两者联合应用以及西药雌二醇肌注3个月后,血清BGP、PTH、CT与模型组比较,BGP降低、PTH降低、CT升高。
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3 讨论
中医将PMO归之于“骨痿”、“骨痹”等范畴,属于本虚标实一类疾病。《素问·痿论》曰“肾主身之骨髓”“肾气热,则腰脊不举,骨枯而髓减,发为骨痿”。《医经精义》有“肾藏精,精生髓,髓养骨,故骨者肾之合也。髓者,肾精所生,精足则髓足,髓在骨内,髓足则骨强”之说。这些都说明了“肾虚”是PMO发病的根本原因。脾胃为后天之本,该病亦与脾胃运化失职有关,又兼老年脉络瘀阻,以致发展为PMO。
表2 各组大鼠血清BGP、PTH、CT值的比较
治疗当以补益肝肾、填精益髓为主,活血化瘀等为辅,标本兼治。六味地黄丸加味是在六味地黄丸基础上加骨碎补、淫羊藿等中药制成,六味地黄丸补益肝肾、骨碎补补肾活血、淫羊藿补肾壮阳,全方共奏补肾壮骨、填精益髓、活血化瘀、扶正祛邪之功。关于耳穴治疗PMO,根据经穴-脏腑相关理论,耳穴与全身脏腑有着密切联系,《灵枢·脉度》云:“肾气通于耳,肾和则耳能闻五音矣”;《灵枢·口问》“耳者,宗脉之所聚也”。现代医学证明[5],耳穴能提高机体的抵抗力和免疫功能,改善肾虚,有改善激素水平,延缓衰老的作用。本实验采用针刺耳穴“肾”和“脾”,“肾”能补肾壮骨,“脾”能健运脾胃,二穴配伍共奏补肾壮骨、疏通经络、调和阴阳之功。
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现代医学认为[6],PMO主要是绝经后雌激素分泌减少,骨吸收及骨形成均加速,呈高转换性骨代谢。由于骨吸收时间较短,成骨时间较长而使骨吸收大于骨形成,久之导致全身骨量逐渐减少,而发生PMO。故常采用与人类PMO变化相似的去势雌鼠建立PMO模型进行实验研究[7,8]。雌性大鼠去势3个月后,模型组大鼠血清雌激素水平下降,同时,BGP与PTH升高,CT则降低。由于E2、BGP、PTH、CT之间有着极为复杂的相互作用。E2可直接通过雌激素受体(ER)作用于成骨细胞和破骨细胞,抑制骨吸收,促进骨形成;E2亦可抑制PTH分泌,降低骨对PTH的敏感性,促进CT的分泌等。其总的对骨效应是抑制骨吸收,促进骨形成,使PMO过高的骨转换率下降。PTH则促进破骨细胞活性,促进骨吸收。CT对骨的效应则与PTH相反,主要是抑制破骨细胞的活性和数量,抑制骨吸收,CT亦可抑制骨形成[9]。BGP是在骨形成过程中由成骨细胞分泌的一种非胶原蛋白,部分释放入血,血清BGP可用来反映骨转换率的高低,血清BGP升高,表明骨转换率升高[10]。耳针组、中药组、耳针+中药组、西药组大鼠去势后分别给予耳针针刺、中药喂饲、耳针+中药两者联合应用以及西药雌二醇肌注治疗3个月后,各组去势雌性大鼠BMC、BMD升高,与此同时,血清雌激素水平升高,PTH降低,CT升高,BGP降低,提示上述治疗均能调整去势大鼠体内E2、BGP、PTH、CT的失平衡状态,抑制骨吸收,促进骨形成,降低骨转换率,纠正骨代谢的负平衡状态,从而防治PMO。
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耳针、中药、耳针+中药防治PMO作用与西药雌二醇相当,前二者单用与其两者联用亦无明显差别。但前三者可避免服用西药雌激素带来的副作用,耳针与西药雌激素比较,可提高内源性雌激素水平,且耳针为双向良性调整作用。故耳针、中药六味地黄丸加味在一定程度上优于西药雌激素。
4 结论
耳针、六味地黄丸加味皆能防治去势雌鼠的PMO,临床上可用为防治PMO的药物和方法。但本实验表明两者联合应用较之两者单用无明显优势。
5 参考文献
1 高平,徐苓,杨秀玉.绝经期妇女骨质疏松症与心血管病.
基础医学与临床.1998;18(3):11
2 ColditzGA,HankinsonSE,HunterDJ,etal.TheUseofEstrogensandProgestinandtheRiskofBreastCancerinPostmenopaupalWomen.NEngJMed,1995;332:1589
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3 GradyD,GebretsadikT,KelikowskeK,etal.HormoneReplacementTherapyandEndometrialCancerRisk:aMetaanalysisObstetGynecol,1995;85:304
4 施新猷.医学动物实验方法.第2版,北京:人民卫生出版社,1986:448
5 黄丽春.耳穴诊断治疗学.北京:科学技术文献出版社,1991:16～31
6 刘忠厚.骨质疏松学.北京:科学出版社,1998:529～530
7 毛碧峰,胡兴山,邓宝东.原发性骨质疏松症动物模型及其选择.辽宁中医杂志,1997;24(5):238
8 丁桂芝,周勇.骨质疏松症研究中动物模型选择与应用.
中国骨质疏松杂志.1997;3(3):85
9 谢晶,杜靖远,沈霖,等.降钙素对卵巢切除大鼠骨转换的影响.中国骨质疏松杂志,1996;2(3):65
10 崔伟,刘成林,史之祯,等.卵巢切除大鼠血清三种骨钙素变化与骨丢失.中国骨质疏松杂志.1996;2(3):16(收稿日期:20000920,齐淑兰发稿), http://www.100md.com(罗小光 刘国忠 指导：贺志光 吕明庄)