稳定表达淋巴细胞趋化因子的大鼠系膜细胞载体的构建
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[摘要] 目的 探讨以肾小球系膜细胞作为高表达大鼠淋巴细胞趋化因子(Ltm)的载体的可行性，从而为深入研究淋巴细胞趋化因子的作用和体内活性创造条件。方法 采用RT-PCR法获得大鼠的Ltn的编码区全长的cDNA序列；应用基因重组技术和限制性内切酶酶切法构建并鉴定pcDNA3.1Ltn真核表达载体；用Lipofec-tAMINE PLUS脂质体转染法将构建的质粒及空质粒瞬时转染于SKOV3细胞；用RT-PCR和ELISA法检测LtnmRNA及蛋白质水平的表达，进而用pcDNA 3.1/Lac Z和pcDNA 3.1/Ltn稳定转染原代培养的WKY大鼠肾小球系膜细胞，用潮霉素B筛选获得稳定表达报告基因LacZ和大鼠Ltn的细胞克隆。结果 测序结果显示质粒载体中正确地插入了大鼠Ltn的编码基因；RT-PCR显示在瞬时转染的SkOV3细胞和稳定转染的4个系膜细胞克隆中ltn mRNA表达增高；ELISA证实细胞培养上清中Ltn的蛋白质浓度较对照组明显升高。此外，X-gal染色显示获得了2个稳定表达β-牛乳糖苷酶基因的系膜细胞克隆。结论 本研究成功地构建了真核表达质粒载体pcDNA 3.1/hygroilltn，获得了稳定表达大鼠Ltn的肾小球系膜细胞克隆，并在mRNA及蛋白质水平上证实了Ltn的表达，为进一步研究Ltn的体内活性奠定了基础。
[关键词] 淋巴细胞趋化因子； 肾小球系膜细胞； 基因转染
[中国图书馆分类法分类号] R 361.3
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