多位点酶切联合ＳＳＣＰ方法检测结核杆菌ｉｎｈＡ基因突变
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[摘要] 目的 建立一种简便而有效的方法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药基因inhA突变。方法 收集结核杆菌临床菌株48株，其中异烟肼敏感株25株，耐药株23株。抽提临床菌株DNA和1-137Rv标准株DNA，聚合酶链反应(PCR)方法扩增inhA基因，产物纯化后用限制性内切酶HaeⅡ酶切，酶切片段用单链多态构象分析(SS—CP)方法检测其单链构象。发现单链构象改变的PCR产物进行nNA测序。结果 48株菌株中，25株敏感株中未见inba基因单链构象差异，23株耐药株中inba基因突变率为21.8%。新发现的错义突变有：A26E、R27K、V28A、Q32A、L54V和572T。结论 应用限制性内切酶HaeⅡ改良的聚合酶链反应一单链多态构象分析(PCR—S5；CP)技术适用于结核临床菌株inhA基因突变的筛选。inhA基因突变位点呈多样性。[关键词] 结核分枝杆菌； inhA基因； 单链多态构象分析； 多位点酶切[中国图书馆分类法分类号] R 378.91+1
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