人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定

http://www.100md.com 2005年8月1日 窦金民 郭莉莉 刘宏磊 陈接根 黄海燕 宋后燕 汤其群

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     [摘要] 目的 表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法 用PCR方法构建人 CNTF的结构基因，并克隆于ply4原核表达载体中。将重组表达质粒ply4-CNTF转化大肠埃希菌JFll25，30℃培养至A_600(nm)达到0.6时，迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞，包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析，获得纯化的CNTF重组蛋白。然后，用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果 42℃诱导后可以获得M_r=22.9X10³的目的蛋白，Western印迹结果进一步表明，其具有人 CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在，占菌体蛋白的35%以上，表达产物经变性、复性，纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论 在大肠埃希菌 JFll25中成功表达了人CNTF分子，经变性、复性，纯化后得到具有生物活性的蛋白。

    [关键词] 人睫状神经营养因子； 重组蛋白； 表达与纯化； 鸡胚背根神经节

    [中国图书馆分类法分类号] Q789

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