ＭＤＲｌ、ＧＳＴπ特异性ｓｉＲＮＡ真核表达载体的构建及表达

http://www.100md.com 2006年2月1日 冯敏华 张 弢 顾静文 林果为

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    [摘要] 目的 构建多药耐药基因(MDRl)、谷胱甘肽S—转移酶(GSTπ)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其表达。方法 参照siRNA模板设计原则，设计并化学合成2条siRNA模板序列，退火后将其插入质粒pSilencer2.1—U6，限制性酶切和基因测序进行鉴定。脂质体介导下转染K562/Adr细胞，实时荧光定量PCR分析MDRl、GSTTrmRNA的表达，荧光免疫组化检测Pgp、GSTπ蛋白的表达。结果 重组质粒psileric—er2.1—MDRl、GSTπ经酶切、测序分析表明siRNA模板序列成功插入预计位点，并且序列正确。用pSilencer—mdrl、pSilencer2.1—GSTTr分别转染K562/Adr细胞株，mdrl mRNA表达量下降了71.5%，GSTTr mRNA表达量下降了39.8%，荧光免疫组化显示Pgp、GSTTr表达均显著减少(P<0.01)。结论 成功构建了MDRl、GSTπ特异性siRNA真核表达载体，该载体可不同程度逆转K562/Adr细胞的多药耐药。

    [关键词] 小片段干扰RNA； 多药耐药； 谷胱甘肽S—转移酶； 多药耐药基因

    [中图分类号] R 557⁺.1

    [文献标识码] A

    

    http://www.100md.com/html/paper/0257-8131/2006/01/06.htm

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