脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体
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[摘要] 目的 制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法，以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法 取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫，分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞，融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养；建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1—C3、2—G9、3—H9；进而在小鼠体内诱生腹水，并用rproteinA亲合层析法纯化；经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上，建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果 纯化的单抗用SDS—PAGE测定纯度，在Mr为150 000左右呈现一条带；Westernblot测定显示1—C3、2—G9、3—H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF，经免疫球蛋白(18)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgGl；用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)ps/mL。结论 用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立，为TF的制备纯化和检测奠定了基础，也使TF的临床深入化研究成为可能。
[关键词] 重组可溶性组织因子； 免疫； 单克隆抗体
[中图分类号] Q813.1
[文献标识码] A
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