人脂联素球状结构域的表达、纯化和功能鉴定

http://www.100md.com 2006年2月1日 刘宏磊 李 希 宋后燕 汤其群

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    [摘要] 目的 表达和纯化人脂联素(adiponectin，APN)球状结构域并观察其生物学活性。方法 用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globulardomainofadiponectin，gAPN)的cDNA，并克隆于pET28a(十)原核表达载体中。将重组表达质粒pET28a(+)—gAPN转化大肠埃希菌BL21(DE3)，37℃培养至A₆₀₀达到0.6时，加入异丙基—β—D硫代半乳糖苷(1PTG)诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破菌，得到粗捉的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化，获得纯化的gAPN重组蛋白，复性后冻干保存。然后，用链佐星(streptozocin，STZ)诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性。结果 IPTG诱导后有M_r约为17 000大小的目的蛋白表达，免疫印迹结果进一步表明，其具有人gAPN的抗原性。表达蛋白主要以包涵体形式存在，占菌体蛋白的30%以上，表达产物经变性、纯化、复性，可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平。结论 在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达了人gAPN蛋白，经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白。

    [关键词] 脂联素； 重组蛋白； 表达与纯化； 高血糖模型

    [中图分类号] Q 57，Q 78

    [文献标识码] A

    

    http://www.100md.com/html/paper/0257-8131/2006/01/23.htm

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