天合保肾合剂对糖尿病肾病大鼠血管内皮功能的影响
 |
摘要 目的：探讨天合保肾合剂对糖尿病肾病(DN)大鼠血管内皮功能的影响。方法:大鼠经背部切除单侧肾,2周后以链尿佐菌素(STZ)尾静脉注射诱导DN模型,观察天合保肾合剂高、中、低剂量组对DN大鼠肾组织血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素(ET)、血小板活性指标血浆血栓素B2(TXB2)与6-酮-前列腺F1α(6-K-PGF1α)含量影响。结果：天合保肾合剂各剂量组均能够降低DN大鼠肾组织VEGF、ET、血浆TXB2水平,升高血浆6-K-PGF1α水平，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)，并呈剂量依赖性。结论：天合保肾合剂能够降低肾组织VEGF、ET水平及TXB2/6-K-PGF1α比值，改善DN大鼠的血管内皮功能障碍。
关键词 天合保肾合剂 糖尿病肾病 血管内皮功能 大鼠
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是常见的糖尿病慢性微血管并发症之一，其发病机制极其复杂，众多研究资料证明糖尿病血管内皮功能损伤是糖尿病血管病变的始动环节及病理生理基础。天合保肾合剂是我院中西医结合肾病中心研制的纯中药制剂，经多年临床观察表明，该方不但能降低血糖、血脂、减少尿蛋白的排泄，还能明显降低血肌酐、尿素氮，延缓糖尿病肾病的进展。本研究用单侧肾脏切除及链尿佐菌素(STZ)尾静脉注射诱导DN大鼠模型，观察具有温肾益气、解毒活血、疏肝泻浊功效的天合保肾合剂对DN大鼠血管内皮功能的影响，以探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物：选用纯系的雄性SD大鼠，体重200~250g(由浙江中医药大学动物实验中心提供)。
1.2 药品与试剂：天合保肾合剂系由中药柴胡、半枝莲、生黄芪、附子、黄芩、海藻、地鳖虫、黄连、土茯苓、水蛭组成，制成实验用浓缩水煎剂(每1ml含生药1.5g)，药材全部购于胡庆余堂药店；卡托普利片由浙江得恩德制药有限公司生产提供，批号0608115；STZ，sigma公司；VEGF批号：RT-110371，ET批号：RT-110371，TXB2批号：RT-110371，6-K-PGF1α批号：RT-110371，上述试剂盒均由美国进口；肝素钠注射液批号：0607117，由江苏万邦生化医药股份有限公司生产提供。
1.3 主要仪器：酶标仪(RS-232C)；TGL-16G常温高速离心机，湖南星科科学仪器有限公司；电子精密天平(AR2130型)，奥豪斯国际贸易有限公司；HR-231CRY冷藏冷冻箱，杭州华日电冰箱有限公司。
1.4 模型制作：大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠进行麻醉，经背部切口切除右肾后缝合伤口，连续3天肌肉注射青霉素钠。14天后将大鼠禁食16小时，正常组注射等量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，其余各组大鼠尾静脉一次性注射STZ(55mg/kg)建立动物模型[1]。5天后大鼠眼眶静脉丛采血测血糖，血糖浓度大于16.7mmol/L为造模成功。
1.5 分组与给药：糖尿病模型大鼠随机分为5组，即模型组30只，天合保肾合剂高、中、低(25g/kg、15g/kg、9g/kg)剂量组、卡托普利阳性对照组(50mg/kg)各20只，另设正常组12只，造模成功血糖稳定后，每组每天灌胃1次，连续给药8周，模型组和正常组均给等量的生理盐水。
1.6 观察指标：如下。
1.6.1 血浆VEGF、TXB2、6-K-PGF1α含量测定：给药第8周末，戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉取血，肝素抗凝，离心分离血浆，按说明方法操作，酶联免疫法测定。
1.6.2 肾组织ET含量测定：给药第8周末，大鼠处死后取左肾组织，制备肾组织匀浆，离心取上清，按说明方法操作，酶联免疫法测定。
1.7 统计学处理：各组数据均以x±s表示，应用SPSS11.5软件分析，多组间的比较用方差分析，P<0.05有显著性差异。
2 结果
实验结果详见表1。由表1可知，肾组织VEGF、ET、血浆TXB2、血浆TXB2/6-K-PGF1α比值，模型组大鼠显著高于正常对照组(P<0.01)，天合保肾合剂高、中、低剂量组显著低于模型组(P<0.01),卡托普利阳性药对照组显著低于模型组(P<0.01)；血浆6-K-PGF1α水平正常对照组、卡托普利阳性药对照组、天合保肾合剂高、中、低剂量组均显著高于模型组(P<0.01)。说明天合保肾合剂能显著降低肾组织VEGF、ET、血浆TXB2、水平，升高血浆6-K-PGF1α水平，降低血浆TXB2/6-K-PGF1α比值，并呈剂量依赖性。
3 讨论
DN是糖尿病最为严重的微血管病变之一。糖尿病持续的高血糖、高血脂、高胰岛素均会使氧化应激增加，氧自由基产生增多，造成血管内皮细胞损伤，促进ET释放增多[2]。ET是糖尿病肾病血管内皮损伤的重要标志物之一。长期ET水平升高，可引起肾小血管及毛细血管持续收缩痉挛导致平滑肌增生和管腔狭窄，使肾小球毛细血管缺血缺氧损伤加重，反过来又促使ET进一步升高，形成恶性循环。
TXA2和PGl2是体内调节血小板聚集功能的主要因子。TXA2由血小板合成释放，是强烈的血管收缩剂和血小板收缩诱导剂[3]，主要作用于肾出球小动脉。而PGI2由血管内皮细胞合成，可舒张血管和抑制血小板聚集，其在肾脏的血管优势效在入球小动脉。TXA2/PGl2的动态平衡，可抑制血小板聚集和血管痉挛，维持正常的血管张力。TXB2和6-K-PGF1α分别为TXA2和PGl2终末代谢产物，可反映TXA2和PGl2的水平[4]。TXA2/PGl2比值失调，相对亢进，血小板过度聚集，血管强烈收缩，使肾小球毛细血管缺血缺氧微循环障碍加重，导致血管内皮细胞产生和释放ET，两者协同作用，与DN的发生发展密切相关。
血管内皮生长因子VEGF是作用于血管内皮最重要的生长因子，与DN的发生发展有着密切的联系，研究表明，VEGF具有肝素结合活性，可刺激内皮细胞的增殖和分化、增加肾小球毛细血管通透性、促进细胞外基质ECM合成、肾小球基底膜增厚及肾脏肥大等参与DN的进展。在DN状态下，高血糖、糖基化终末产物、各种细胞因子如转化生长因子(TGF-B)、血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)等均可以上调VEGF的合成和分泌。而VEGF表达的上调则可使内皮细胞中一氧化氮(NO)合成酶表达增加，从而使得NO生成增加，参与了内皮细胞的功能障碍[5]。故VEGF表达过多也可能是加重糖尿病病变的独立危险因素，调整VEGF/VEGFR系统将可缓解糖尿病肾病的发生、发展。
本研究结果表明，天合保肾合剂能显著降低血浆VEGF及肾组织ET水平，促使失调的TXA2与PGl2恢复平衡。说明天合保肾合剂能够抑制血小板聚集，扩张血管，防止血管内皮细胞损伤，对DN大鼠血管内皮功能损伤具有保护作用。
4 参考文献
[1]刘学政，羊惠君，李瑞祥.实验性链尿佐菌素糖尿病动物模型的建立与研究[J].四川解剖学杂志，1996,4(3)：169-174.
[2]刘雨清，张伟栋，吴洪娟,等.高糖血症、高胰岛素血症对血管内皮细胞的影响[J].中国糖尿病杂志,2000,8(6)：351.
[3]HambergM,Svensson J,Samulsson B.Thromboxanes:a new group of biologically active compounds derived from prostaglandin endioperoxides[J].Proc Natl Acad Sci USA,1975,72:2994.
[4]何立群，曹和欣，沈雅静.糖肾宁对早期糖尿病肾病大鼠微量白蛋白鸟的作用及其机制研究[J].中西医结合学报，2003,1(2)：119-121.
[5]王晶晶，陈江华.血管内皮特异性生长因子和糖尿病肾病[J].医学综述，2006,12(1)：36-38.
收稿日期 2008-08-12, 百拇医药(严仲庆 何敏尔 张 菁 范 铧 沈伟钢 朱声宏 胡松春 杜洪)